[发明专利]用于增强细胞毒性细胞和干细胞疗效的新型RNA构建体和方法

说明书

本发明包括用于增强细胞毒性细胞和干细胞效果的Rig I激动剂。所述Rig I激动剂可体内用作小分子治疗剂或体外强化用于过继细胞转移的细胞。应用包括癌症治疗、免疫系统强化、慢性病毒性感染和病毒诱导感染的治疗以及病毒疗法的强化。

优先权和援引纳入

本申请要求2016年4月1日提交的美国临时专利申请第62/316,679号的优先权，其全文通过援引纳入本文。本文所引用的所有文献通过援引明确纳入本文。

背景

天然杀伤(NK)细胞和细胞毒性T细胞(“CD8细胞”)的治疗效果受到这些细胞毒性细胞中端粒酶B和/或穿孔素相对量(“载荷(load)”)的影响。NK细胞和CD8T细胞合称“细胞毒性细胞”。细胞毒性细胞，包括所谓过继细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、嵌合抗原受体(CAR)修饰细胞和干细胞(在此合称过继细胞转移)，目前正作为治疗性疗法(包括多种类型癌症治疗)处于多项临床试验中。过继细胞转移治疗成功的关键因素之一是NK细胞和CD8T细胞中的端粒酶B和穿孔素载荷。细胞毒性细胞在对恶性转化细胞的早期先天性反应中起重要作用。细胞毒性细胞经其细胞表面各种活化受体或因肿瘤细胞上人自体白细胞抗原(HLA)缺失而激活(Karre等,1986；Lanier,2001)。

NK和CD8⁺T细胞的细胞毒性主要由端粒酶B和穿孔素的释放或由死亡受体配体如FasL和TNF相关凋亡配体(TRAIL)的表达介导。激活后，裂解性颗粒被送入效应细胞与靶细胞形成的细胞间连接(Henkart,1985)。过继细胞(包括TIL和CAR遗传修饰的细胞毒性细胞)转移的标准做法目前是在过继转移之前通过体外暴露于细胞因子来激活细胞。然而，限制性因素是要实现每个细胞毒性细胞充分的连环杀伤效应，而这高度依赖于穿孔素和端粒酶B的载荷。并且，细胞在转染过程中和/或在体内对病毒的耐受性或缺乏耐受性也很重要。

溶胞性颗粒加载的核心步骤是胞内RNA识别位点(例如MDA-5即“黑瘤素分化相关因子5”和Rig-I即“视黄酸诱导性基因I”)的活化，这继而直接引起活化细胞应答。

已发现，具有5’-三磷酸末端(5’ppp)且小于100(100)核苷酸的病毒RNA或合成dsRNA分子诱导RIG-I(Goubau等,2014；Hornung等,2006)。此外，5’-末端和一定长度或至少20个核苷酸的钝端碱基配对对于RIG-I的良好结合和活化也很重要(Goubau等，2014；Hornung等，2006)。活化的RIG-I通过其CARD结构域与线粒体转接蛋白MAVS相互作用。MAVS活化引起IKK相关激酶TBK1和IKKε活化，继而致IRF-3和IRF-7磷酸化并激活NF-κB路径。并且，这直接诱导I型IFN(IFN-β和IFN-α)免疫应答以及促炎因子和有选择的特定抗病毒基因如IFN-刺激基因15(ISG15)及其他ISG的转录和分泌(Grandvaux等，2002；Kawai等，2005；Liu等，2011；Takeuchi等，2010)。

本领域需要这样的RNA构建体，它对RIG-I高度特异性，能够提高NK细胞和细胞毒性T细胞中穿孔素和端粒酶B的载荷，从而克服NK细胞和CD8⁺T细胞过继转移中的障碍之一。

已知RIG I对于干细胞活力及活力持久性起重要作用。RIG I活化被认为下调导致干细胞早夭的相关过程。业内需要这样的RIG I激动剂，它提高干细胞的活力和植入能力。

业内一直需要更好的治疗癌症的溶瘤性病毒疗法。

发明目的

本发明目的之一是提供一种RNA分子，它提高细胞毒性细胞中穿孔素的量。

本发明目的之一是提供一种RNA分子，它提高细胞毒性细胞中端粒酶B的量。

本发明目的之一是通过给予小分子来提高细胞毒性细胞中穿孔素的量。