[发明专利]用于体外制造胃底组织的方法和与其相关的组合物

权利要求书

1.一种诱导胃底组织形成的体外方法，其包括以下步骤：

a)将哺乳动物定形内胚层即DE细胞与wnt途径活化剂、FGF信号传导途径活化剂、BMP信号传导途径抑制剂以及视黄酸接触第一时间段，以从所述定形内胚层形成三维后部前肠球形体，其中所述wnt途径活化剂是CHIR99021，所述FGF信号传导途径活化剂是FGF4，所述BMP信号传导途径抑制剂是头蛋白，所述第一时间段是三天±24小时，并且其中所述视黄酸在所述时间段±24小时的最后一天添加；

b)将所述三维后部前肠球形体在具有所述wnt途径活化剂、EGF信号传导途径活化剂、所述BMP信号传导途径抑制剂以及视黄酸的基底膜基质中悬浮第二时间段，以形成包括人类胃底类型胃类器官即hFGO，其中所述wnt途径活化剂是CHIR99021，所述EGF信号传导途径活化剂是EGF，所述BMP信号传导途径抑制剂是头蛋白，所述第二时间段是三天±24小时；

c)将步骤b)的所述hFGO用所述wnt途径活化剂和所述EGF信号传导途径活化剂培养第三时间段，其中所述wnt途径活化剂是CHIR99021，所述EGF信号传导途径活化剂是EGF，所述第三时间段是11天±24小时；

d)将步骤c)的所述hFGO用所述wnt途径活化剂、所述EGF信号传导途径活化剂和FGF10培养第四时间段，其中所述wnt途径活化剂是CHIR99021，所述EGF信号传导途径活化剂是EGF，所述第四时间段是10天±24小时；

e)将步骤d)的所述hFGO与MEK抑制剂接触第五时间段，以形成所述hFGO中的壁细胞或主细胞或者壁细胞和主细胞，其中所述MEK抑制剂是PD0325901，所述第五时间段是两天时间段±24小时。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤e)还包括将所述hFGO与BMP4接触的步骤。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述壁细胞表达质子泵蛋白并且分泌酸。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述主细胞分泌胃蛋白酶原。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤e)进行后，所述hFGO发育SOX2+GATA+PDX1-上皮组织。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤d)和所述步骤e)进行后，所述hFGO表达MUC5AC、MUC6、PGC和GHRL。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述定形内胚层细胞衍生自选自以下的前体细胞：胚胎干细胞和诱导的多能干细胞。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述定形内胚层由将多能干细胞与包含活化素A的组合物接触而衍生。

9.一种包含根据权利要求1-8中任一项的方法产生的胃底组织的组合物，其中所述胃底组织的特征在于：

a)不具有神经分布和/或血管；

b)ATP4A和ATP4B表达上调；并且

c)包含表达质子泵蛋白并且分泌酸的壁细胞。