[发明专利]用于检测生殖支原体的组合物和方法

权利要求书

1.一组靶标MG基因引物和一种或多种可检测的靶标MG基因探针在制备用于执行检测样品中生殖支原体（MG）的方法的试剂盒中的用途，所述方法包括：

- 执行扩增步骤，其包括使样品与一组靶标MG基因引物接触，如果所述样品中存在靶标MG基因核酸，则产生扩增产物；

- 执行杂交步骤，其包括使扩增产物与一种或多种可检测的靶标MG基因探针接触；和

- 检测所述扩增产物的存在或不存在，其中所述扩增产物的存在指示所述样品中MG的存在，并且其中所述扩增产物的不存在指示所述样品中MG的不存在；

其中所述靶标MG基因引物组和所述一种或多种可检测的靶标MG基因探针扩增和检测mgpB部分重复序列（MgPar）的可变EF区域；且

其中所述靶标MG基因引物组包含第一引物和第二引物，所述第一引物含有选自SEQ IDNO: 47-56的第一寡核苷酸序列，或其互补物，所述第二引物含有选自SEQ ID NO: 57-66的第二寡核苷酸序列，或其互补物；和

其中一种或多种可检测的靶标MG基因探针包含选自SEQ ID NO: 67-89的第三寡核苷酸序列或其互补物。

2.权利要求1的用途，其中

- 所述杂交步骤包括使扩增产物与可检测的靶标MG基因探针接触，所述可检测的靶标MG基因探针使用供体荧光部分和相应的受体部分标记；和

- 所述检测步骤包括检测所述探针的供体荧光部分和受体部分之间的荧光共振能量转移（FRET）的存在或不存在，其中荧光的存在或不存在指示了样品中MG的存在或不存在。

3.权利要求1-2中任一项的用途，其中所述扩增步骤采用具有5’至3’核酸酶活性的聚合酶。

4.权利要求2-3中任一项的用途，其中所述供体荧光部分和相应的受体部分在探针上彼此不超过8-20个核苷酸内。

5.权利要求2-4中任一项的用途，其中所述受体部分是猝灭剂。

6.权利要求1-5中任一项的用途，其进一步包括用于扩增和检测MgPa黏附操纵子中mgpB基因的保守区域A的靶标MG mgpB基因引物组和一种或多种可检测的靶标MG mgpB基因探针。

7.权利要求6的用途，其中所述靶标MG mgpB基因引物组包含第一引物和第二引物，所述第一引物含有选自SEQ ID NO: 29-35的第一寡核苷酸序列，或其互补物，所述第二引物含有选自SEQ ID NO: 36-41的第二寡核苷酸序列，或其互补物；和其中所述一种或多种可检测的靶标MG mgpB基因探针包含选自SEQ ID NO: 42-46的第三寡核苷酸序列或其互补物。

8.一种用于检测生殖支原体（MG）的核酸的试剂盒，其包括：

- 第一引物，其包含选自SEQ ID NO: 47-56的第一寡核苷酸序列，或其互补物；

- 第二引物，其包含选自SEQ ID NO: 57-66的第二寡核苷酸序列，或其互补物；和

- 荧光可检测标记探针，其包含选自SEQ ID NO: 67-89的第三寡核苷酸序列，或其互补物，所述可检测标记探针被配置为与由第一引物和第二引物生成的扩增子杂交。

9.权利要求8的试剂盒，其中所述荧光可检测标记探针包含供体荧光部分和相应的受体部分。

10.权利要求9的试剂盒，其中所述受体部分是猝灭剂。

11.权利要求8-10中任一项的试剂盒，其进一步包括至少一种三磷酸核苷、核酸聚合酶和对于核酸聚合酶功能所必需的缓冲液。

12.权利要求8-11中任一项的试剂盒，其进一步包括用于扩增和检测MgPa黏附操纵子中mgpB基因的保守区域A的靶标MG mgpB基因引物组和一种或多种可检测的靶标MG mgpB基因探针。