[发明专利]用于在微生物中产生蛋白质的工程化核糖体启动子

说明书

本公开总体上涉及来自芽孢杆菌属的新颖工程化杂合核糖体启动子。在某些实施例中，本公开涉及一种或多种核酸组合物，其包含与编码目的蛋白质的核酸有效地连接的所述工程化启动子。因此，本文所阐述的公开描述了使用本公开的一种或多种新颖工程化杂合核糖体启动子产生目的蛋白质的方法和组合物。

技术领域

本发明总体上涉及分子生物学和基因工程领域。在某些实施例中，本发明涉及工程化启动子的用途，并且更具体地涉及工程化杂合核糖体启动子的用途，用于在宿主微生物中表达和产生一种或多种目的蛋白质。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2016年3月04日提交的美国临时申请号62/304,061的权益，该临时申请通过引用以其全文特此结合。

序列表的引用

命名为“NB40928WOPCT-SequenceListing.txt”的文本文件序列表的电子提交的内容创建于2017年3月06日，并且大小为72KB，将其通过引用以其全文特此结合。

背景技术

基因工程促进了用作工业生物反应器或细胞工厂的宿主微生物的各种改进。例如，革兰氏阳性芽孢杆菌属(Bacillus)物种产生并分泌大量有用的蛋白质和代谢物。工业中使用的最常见芽孢杆菌属物种是地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)和枯草芽孢杆菌(B.subtilis)。由于其通常认为安全(GRAS)的状态，这些芽孢杆菌属物种的菌株是用于产生用于食品和制药工业中的蛋白质的天然候选物。例如，重要的生产酶包括α-淀粉酶、中性蛋白酶、碱性(或丝氨酸)蛋白酶等。然而，尽管在芽孢杆菌属宿主细胞中生产蛋白质的知识有所进步，仍然需要通过微生物改善这些蛋白质的表达和产生的方法及其组合物。

由目的基因(或ORF)编码的目的蛋白质(POI)的重组产生通常通过构建适用于所需宿主细胞的表达载体来完成，其中编码所需POI的核酸置于启动子的表达控制之下。因此，通过各种技术(例如，经由转化)将表达载体引入宿主细胞，并通过在适于表达和产生蛋白质产物的条件下培养经转化的宿主细胞来实现所需蛋白质产物的产生。例如，本领域已经描述了用于功能性多肽的同源和/或异源表达的芽孢杆菌属启动子(及其相关元件)(例如，参见PCT国际公开号WO 2013086219；美国专利号4,559,300；Kim等人，2008，等)。

尽管已知许多启动子，但本领域仍需要新颖启动子，其改善编码目的蛋白质的同源和/或异源核酸的表达。例如，在工业生物技术领域中，甚至工业相关蛋白质(例如，酶、抗体、受体等)的表达水平的小幅增加也转化为所产生的POI的显著成本、能量和时间节省。本发明的新颖且令人惊讶的有效工程化杂合启动子解决了本领域长期感觉到的需求。

发明内容

在某些实施例中，本发明涉及工程化启动子，并且更特别地工程化杂合核糖体启动子的用途，用于在宿主微生物中表达和产生一种或多种目的蛋白质。