[发明专利]分离基质

权利要求书

1. 一种分离基质，其包含至少11、例如至少15、15-21、17-21或18-20 mg/ml与多孔载体共价偶联的Fc-结合配体，其中：

a)所述配体包含碱稳定的蛋白A结构域的多聚体，

b)所述多孔载体包含具有56-70微米的体积加权的中位直径(d50,v)和55-80 mg/ml的干固体重量的交联聚合物颗粒。

2.权利要求1的分离基质，其中所述交联聚合物颗粒包含交联多糖颗粒。

3.权利要求1或2的分离基质，其中所述交联聚合物颗粒包含交联琼脂糖颗粒。

4. 任何前述权利要求的分离基质，其中所述交联聚合物颗粒具有对于Mw 110 kDa的葡聚糖，对应于0.69-0.85的反相凝胶过滤色谱Kd值的孔径。

5.任何前述权利要求的分离基质，其中所述多聚体包含碱稳定的蛋白A结构域的四聚体、五聚体、六聚体或七聚体。

6.任何前述权利要求的分离基质，其中所述多聚体包含碱稳定的蛋白A结构域的六聚体。

7. 任何前述权利要求的分离基质，以2.4 min停留时间，其对于IgG具有至少45 mg/ml、例如至少50或至少55 mg/ml的10%穿透动态结合能力。

8. 任何前述权利要求的分离基质，以6 min停留时间，其对于IgG具有至少60 mg/ml、例如至少65、至少70或至少75 mg/ml的10%穿透动态结合能力。

9. 任何前述权利要求的分离基质，其中在1.0 M水性NaOH中在22 +/- 2 C孵育31 h后，以2.4 min或6 min停留时间对于IgG的10%穿透动态结合能力减少少于20%。

10. 任何前述权利要求的分离基质，在20 mM磷酸盐缓冲液、180 mM NaCl、pH 7.5中，其对于IgG2具有低于0.2 mg/ml、例如低于0.1 mg/ml的离解常数。

11. 任何前述权利要求的分离基质，当以300 +/-10 mm床高度在FineLine^TM 35柱中装填时，其具有至少0.58、例如至少0.60 MPa的最大压力。

12. 任何前述权利要求的分离基质，其中所述碱稳定的蛋白A结构域包含葡萄球菌蛋白A (SpA)的亲本Fc-结合结构域的突变体，所述突变体由SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO 51或SEQ ID NO 52定义，其中至少在对应于SEQ ID NO:4-7的位置11的位置的天冬酰胺或丝氨酸残基已被突变为选自谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丙氨酸、组氨酸和精氨酸的氨基酸。

13. 权利要求12的分离基质，其中在对应于SEQ ID NO:4-7的位置11的位置的氨基酸残基为谷氨酸或赖氨酸或已被突变为谷氨酸或赖氨酸。

14. 权利要求12或13的分离基质，其中在对应于SEQ ID NO:4-7的位置9的位置的氨基酸残基是丙氨酸。

15. 权利要求12或13的分离基质，其中在对应于SEQ ID NO:4-7的位置9的位置的氨基酸残基已被缺失。

16. 权利要求12-15中任一项的分离基质，其中在对应于SEQ ID NO:4-7的位置40的位置的氨基酸残基为缬氨酸或已被突变为缬氨酸。