[发明专利]用于冷冻多能干细胞来源心肌细胞的聚集体的方法

说明书

本公开提供了一种冷冻多能干细胞来源心肌细胞的聚集体的方法，所述方法包括：(i)将多能干细胞来源心肌细胞的聚集体浸入冷冻保护液中；和(ii)冷冻浸入所述冷冻保护液中的所述聚集体。本公开还提供了通过该方法冷冻的冷冻多能干细胞来源心肌细胞聚集体。

技术领域

本申请要求日本专利申请号2016-055913的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

本公开涉及用于冷冻多能干细胞来源心肌细胞的聚集体的方法。

背景技术

期望将来源于多能干细胞的心肌细胞实际应用于诸如细胞移植、药物筛选和心脏毒性评价的应用。这样的实际应用将需要同一批具有相同功能性质的心肌细胞的大量生产和供应以及高效的用于低温保存心肌细胞的方法。

当前的用于冷冻多能干细胞来源心肌细胞的方法利用蛋白水解酶分散多能干细胞来源心肌细胞的片状或集落状聚集体并且以单细胞状态冷冻分散的心肌细胞。这些方法导致不稳定且低的细胞存活率，并且由于蛋白水解酶或冷冻造成的损坏难以再现均匀的聚集体。另外，当将心肌细胞以单细胞状态冷冻时，在细胞解冻后则无法再现在冷冻前的电生理学功能模式(如细胞内钙变化波形或心率)。这会是因为随着心肌细胞以单细胞状态分散和冷冻，丢失了原始心肌细胞聚集体的三维结构如形状或细胞间结合的信息。

引用清单

专利文献

专利文献1：WO2012/026491

专利文献2：WO2013/111875

专利文献3：WO2014/136519

专利文献4：WO2015/037706

专利文献5：WO2015/182765

专利文献6：美国专利申请公开号2013/0183753

专利文献7：美国专利申请公开号2014/0127807

专利文献8：美国专利申请公开号2015/0017718

专利文献9：美国专利申请公开号2016/0002600

非专利文献

非专利文献1：Kim YY等，Cryopreservation of human embryonic stem cellsderived-cardiomyocytes induced by BMP2 in serum-free condition(在无血清条件中由BMP2诱导的人胚胎干细胞来源心肌细胞的低温保存)，Reprod Sci.2011年3月；18(3):252-60。doi:10.1177/1933719110385130.Epub 2011年1月25日。

发明概述

本公开的一个目的是提供冷冻多能干细胞来源心肌细胞的聚集体的方法以及冷冻的多能干细胞来源心肌细胞的聚集体。

在一个实施方案中，本公开提供了一种冷冻多能干细胞来源心肌细胞的聚集体的方法，所述方法包括：

(i)将多能干细胞来源心肌细胞的聚集体浸入冷冻保护液中；和

(ii)冷冻浸入所述冷冻保护液中的所述聚集体。

在另一个实施方案中，本公开提供了一种制备冷冻的多能干细胞来源心肌细胞的聚集体的方法，所述方法包括：

(i)将多能干细胞来源心肌细胞的聚集体浸入冷冻保护液中；和

(ii)冷冻浸入所述冷冻保护液中的所述聚集体。

在另一个实施方案中，本公开提供了一种通过所述方法冷冻或制备的冷冻的多能干细胞来源心肌细胞的聚集体。