[发明专利]一种化学-酶法制备熊去氧胆酸的方法

说明书

一种化学‑酶法制备熊去氧胆酸的方法，包括将猪去氧胆酸加入到第一有机溶剂中，并在氧化剂作用下氧化得到6‑氧代‑石胆酸得到6‑氧代‑石胆酸；将所述6‑氧代‑石胆酸和磺酰肼衍生物加入到第二有机溶剂中，使所述6‑氧代‑石胆酸和所述磺酰肼衍生物发生亲核加成‑消去反应，得到腙类化合物；在惰性气体环境下，采用还原剂将所述腙类化合物还原得到石胆酸；将所述石胆酸在羟化酶和辅酶的催化作用下进行羟基化反应，得到熊去氧胆酸。该方法以猪去氧胆酸为初始原料，经过三步化学法和一步生物酶法得到熊去氧胆酸，整个合成工艺步骤少，操作简单，产率高，成本低，可以广泛适用于工业化规模生产。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种化学-酶法制备熊去氧胆酸的方法。

背景技术

熊去氧胆酸(Ursodeoxycholic acid,UDCA)，分子式为C₂₄H₄₀O₄，是中药熊胆的主要成份，其化学名称为(3α，7β)-二羟基-5β-胆烷酸，是鹅去氧胆酸(Chenodeoxycholic acid,CDCA)的7β-羟基差向异构体。UDCA曾主要用于治疗胆石病。近年来，国外报道了UDCA在治疗各种急性、慢性肝病中的应用。新的研究表明，UDCA不仅对于治疗原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、慢性活动性肝炎具有良好的疗效，还可用于治疗慢性肝炎和肝移植后排斥反应。因此，随着研究的深入，UDCA的利用价值越来越被认识和受到人们的重视，对UDCA的需求量也在逐年升高。

由于中药熊胆为割取熊的胆囊而制成，来源有限，而且有违于动物保护。我国现在采取人工养殖，活熊提取UDCA，但步骤多、周期长、收得率低，不能满足医疗要求，因而人工合成UDCA具有重要意义。目前UDCA的生产工艺主要以鹅去氧胆酸(CDCA)为原料，经过酯化、氧化、还原的方法制备，该产品国内外市场需求量大，而CDCA资源有限，其市场价格逐年升高，造成以鹅去氧胆酸为原料的合成路线成本居高不下。相对而言，猪去氧胆酸(Hyodeoxycholic acid,HDCA)的来源较为广泛，成本较低，因此以HDCA为起始原料人工合成UDCA具有着重要的意义。然而，目前从HDCA合成UDCA都是化学方法，合成步骤均需要7步左右，并且收率低；此外，化学方法常使用到高污染的试剂，比如重铬酸吡啶盐。

因此，开发一条生产UDCA步骤少、转化率高且更环保的合成方法变得越来越迫切。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种化学-酶法制备熊去氧胆酸的方法，共涉及三步化学法和一步酶法，大大减少了传统方法制备过程中繁多的合成步骤，同时本发明所述化学-酶法制备熊去氧胆酸的方法具有低成本、高收率、低污染的特点。

本发明提供了一种化学-酶法制备熊去氧胆酸的方法，包括：

(1)将猪去氧胆酸加入到第一有机溶剂中，并在氧化剂作用下，使所述猪去氧胆酸氧化得到化学结构式如式(Ⅰ)所示的6-氧代-石胆酸，

(2)将所述6-氧代-石胆酸和磺酰肼衍生物加入到第二有机溶剂中，使所述6-氧代-石胆酸和所述磺酰肼衍生物发生亲核加成-消去反应，得到化学结构式如式(Ⅱ)所示的腙类化合物，

式(Ⅱ)中，R为氢、甲基、乙基、丙基和丁基；

(3)在惰性气体环境下，采用还原剂将所述腙类化合物还原得到石胆酸(Lithocholic acid，LCH)；

(4)将所述石胆酸在羟化酶和辅酶的催化作用下进行羟基化反应，得到熊去氧胆酸。

本发明中，所述化学-酶法制备熊去氧胆酸的方法的具体工艺路线如下所示：