[发明专利]抗-CRISPR化合物以及使用方法

权利要求书

1.质粒，其包含核酸序列，所述核酸序列编码：i)从由下列各项组成的组中选择的II-C型抗-CRISPR(Acr)氨基酸序列的至少一部分：脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriameningitidis)Acr、裸面小绢猴布拉克氏菌(Brackiella oedipodis)Acr、流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)Acr、米氏西蒙斯氏菌(Simonsiella muelleri)Acr、茄罗尔斯通氏菌(Ralstonia solanacearum)Acr和与脑膜炎奈瑟氏球菌Cas9蛋白具有至少47％同源性的Cas9蛋白相结合的Acr；ii)抗-CRISPR-相关的转录调节物蛋白；和iii)启动子。

2.权利要求1的质粒，其中所述所编码的II-C型Acr氨基酸序列的至少一部分进一步包含加合物，其选自由下列各项组成的组：核定位序列、亲和标签、表位序列标签和DYKDDDDK肽。

3.一种组合物，其包含II-C型脑膜炎奈瑟氏球菌(Nme)Cas9蛋白，以及从由下列各项组成的组中选择的II-C型抗-CRISPR(Acr)氨基酸序列的至少一部分：脑膜炎奈瑟氏球菌Acr、裸面小绢猴布拉克氏菌Acr、流感嗜血菌Acr、米氏西蒙斯氏菌Acr、茄罗尔斯通氏菌Acr和与脑膜炎奈瑟氏球菌Cas9蛋白具有至少47％同源性的Cas9蛋白相结合的Acr。

4.权利要求3的组合物，其中所述II-C型Acr氨基酸序列进一步包含加合物，其选自由下列各项组成的组：核定位序列、亲和标签、表位序列标签和DYKDDDDK肽。

5.权利要求3的组合物，其中所述II-C型NmeCas9蛋白为II-C型dNmeCas9蛋白。

6.一种方法，其包括：

a)提供：

i)包含至少一个可疑基因的生物细胞；

ii)II-C型脑膜炎奈瑟氏球菌(Nme)Cas9/sgRNA复合物，

其中所述sgRNA能够与至少一个可疑基因的靶位点杂交，并且所述II-C型NmeCas9蛋白包含结合位点；和

iii)从由下列各项组成的组中选择的II-C型抗-CRISPR(Acr)氨基酸序列的至少一部分：脑膜炎奈瑟氏球菌Acr、裸面小绢猴布拉克氏菌Acr、流感嗜血菌Acr、米氏西蒙斯氏菌Acr、茄罗尔斯通氏菌Acr和与脑膜炎奈瑟氏球菌Cas9蛋白具有至少47％同源性的Cas9蛋白相结合的Acr，其以特异性亲和力与所述结合位点相结合；

b)使所述II-C型NmeCas9/sgRNA复合物与所述生物细胞相接触，从而使得所述II-C型NmeCas9/sgRNA复合物与所述靶位点杂交；

c)用所述II-C型NmeCas9/sgRNA复合物编辑所述可疑基因；和

d)使所述结合位点与所述II-C型抗-CRISPR氨基酸序列的所述至少一部分相接触，从而使得所述编辑被减少。

7.权利要求6的方法，其中所述II-C型NmeCas9蛋白为II-C型dNmeCas9蛋白。

8.权利要求6的方法，其中所述减少的编辑防止NmeCas9结合的至少一个脱靶事件。

9.权利要求8的方法，其中所述至少一个脱靶事件选自由下列各项组成的组：DNA切割和DNA突变。

10.权利要求8的方法，其中所述减少的编辑在细胞周期的G1期期间出现。

11.权利要求6的方法，其中所述减少的编辑防止嵌合基因型。

12.权利要求6的方法，其中所述减少的编辑抑制基因驱动。

13.权利要求6的方法，其中所述减少的编辑选自由下列各项组成的组：至少70％、75％、90％和100％。