[发明专利]转化植物的制备方法

说明书

本发明提供一种未使用体外培养体系的愈伤组织或组织片的植物的转化方法。另外，本发明提供一种不导入选择标记物基因的植物转化方法。另外，本发明提供一种重现性优异的转化植物的制备方法。所述植物的转化方法包括：利用至少1种核酸包覆直径0.3μm以上且0.9μm以下的微粒的工序、使用粒子枪将该包覆后的微粒射入完全成熟种子的胚的芽端的工序、使射入了该包覆后的微粒的芽端生长而得到植物体的工序、以及从该植物体中选择转化植物体的工序。

技术领域

本发明涉及使用了粒子枪(粒子轰击法)法的植物的原位转化方法。

背景技术

目前已经普及的植物的通常的转化方法是借助电穿孔法、根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)或通过粒子枪法等将外源基因导入体外培养体系的原生质体、愈伤组织或组织片等的方法。但是，在这些方法中，即使将基因导入了细胞或组织，也存在以下问题：根据植物品种，难以进行组织培养，且难以使植物体再生而制备转化体。另外，转化效率不够高，因此也存在必须导入筛选标记物基因进行标记物筛选的问题。另外，随着需要长期的组织培养，在体细胞突变(体细胞克隆变异)频繁发生方面也存在问题。因此，从减轻转化植物制备的劳动力、转化植物的安全性的观点考虑，要求开发不需要组织培养的植物原位(in planta)转化方法及植物原位转化植物体的制备方法。

另一方面，在小麦、稻等中，已知不使用体外培养体系的愈伤组织或组织切片的转化法(植物原位转化法)。作为植物原位转化方法，已知使用粒子枪法对暴露的未成熟胚或完全成熟胚的芽端直接导入基因的方法(非专利文献1)。另外，专利文献1及非专利文献2中记载了使土壤杆菌感染刚刚发芽后的完全成熟胚进行基因导入的方法。

但是，这些文献中记载的方法均在很大程度上依赖实验者的手法，因此基因导入效率低，在重现性方面存在改进的余地。另外，非专利文献1尚未证明导入基因可传递至下一代。由于这些因素，上述方法目前仍未被广泛使用。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开WO2005/024034号

非专利文献

非专利文献1：Bilang et al.(1993)Transient gene expression invegetative shot apical meristems of wheat after ballisticmicrotargeting.Plant Journal(1993)4,735-744

非专利文献2：Supartana et al.(2005)Development of simple and efficientin planta transformation for rice(Oryza sativa L.)using Agrobacteriumtumefaciencs.Journal of Bioscience AND Bioengineering(2005)4,391-397

发明内容

发明要解决的课题

本发明提供一种不使用体外培养体系的愈伤组织或组织片的植物的转化方法。另外，本发明提供一种不导入筛选标记物基因的植物转化方法。此外，本发明提供一种重现性优异的转化植物的制备方法。

解决课题的方法

本发明人等为了解决上述课题而进行了深入研究，结果完成了本发明。

即，本发明包含以下部分。

(1)一种植物的转化方法，该方法包括：利用至少1种核酸包覆直径0.3μm以上且0.9μm以下的微粒的工序、使用粒子枪将该包覆后的微粒射入入完全成熟种子的胚的芽端或块茎的幼芽的芽端的工序、使射入了该包覆后的微粒的芽端生长而得到植物体的工序、以及从该植物体中选择转化植物体的工序。