[发明专利]在重组宿主中产生甜菊醇糖苷

权利要求书

1.一种能够产生一种或多种甜菊醇糖苷和/或糖基化的甜菊醇前体或其组合物的重组宿主细胞，所述重组宿主细胞包含：

(a)编码能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化的多肽的基因，所述多肽与SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列具有至少55％序列同一性，并且还具有至少一个对应于SEQ ID NO：4的残基79、80、81、83、184、260、286或377的氨基酸取代；

(b)编码能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化的多肽的基因，所述多肽与SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列具有至少55％序列同一性，并且还具有至少一个对应于SEQ ID NO：4的残基68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82或83的氨基酸取代；

(c)编码能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化并使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-13羟基处糖基化的双功能多肽的基因，所述双功能多肽与SEQ ID NO：132、SEQ IDNO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140或SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：146或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列具有至少50％序列同一性；和/或

(d)编码能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化的经标记的多肽的基因，所述多肽与SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：178或SEQ ID NO：180所示的氨基酸序列具有至少55％序列同一性；

其中所述基因中的至少一种是重组基因；以及

其中所述重组宿主细胞能够产生对映-贝壳杉烯酸、对映-贝壳杉烯醇或甜菊醇的糖苷。

2.如权利要求1所述的重组宿主细胞，其中能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化的所述多肽包含对应于SEQ ID NO：4的M79V、M79E、S80C、A81W、E83K、H184V、H184TN260T、K286C、K286E、K286N、K286T和/或S377Q氨基酸取代。

3.如权利要求1所述的重组宿主细胞，其中能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化的所述多肽包含：

(a)对应于SEQ ID NO：4的K286C取代；

(b)对应于SEQ ID NO：4的M79V取代；

(c)对应于SEQ ID NO：4的S377Q取代；

(d)对应于SEQ ID NO：4的S80C取代；

(e)对应于SEQ ID NO：4的N260T和K286C取代；

(f)对应于SEQ ID NO：4的H184V取代；

(g)对应于SEQ ID NO：4的A81W和E83K取代；

(h)对应于SEQ ID NO：4的A81W取代；

(i)对应于SEQ ID NO：4的H184T取代；

(k)对应于SEQ ID NO：4的K286N取代；

(l)对应于SEQ ID NO：4的M79E取代；或

(m)对应于SEQ ID NO：4的K286T取代。

4.如权利要求1-3中任一项所述的重组宿主细胞，其中能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化的所述多肽还包含标签。

5.如权利要求4所述的重组宿主细胞，其中所述标签包含与SEQ ID NO：152的二硫化物氧化还原酶、SEQ ID NO：153的麦芽糖结合蛋白、SEQ ID NO：154的N-利用物质或SEQ IDNO：155的小遍在蛋白样修饰物具有至少90％同一性的标签序列。

6.如权利要求4或5所述的重组宿主细胞，其中能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化的所述多肽包含与SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：178或SEQ IDNO：180所示的氨基酸序列具有至少55％序列同一性的多肽。