[发明专利]目标分子的检测方法及目标分子检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种目标分子的检测方法，其具备下述工序：准备用多个核酸片段标记且所识别的表位互不相同的多个种类的特异性结合物质、和多个种类的第一目标分子的工序，所述多个核酸片段具有产生互不相同的荧光波长的荧光信号的标记物质；使所述多个种类的所述特异性结合物质与所述多个种类的所述第一目标分子结合的工序；分别检测所述多个种类的所述特异性结合物质的工序；以及根据与所述多个种类的所述特异性结合物质对应的多个所述荧光信号来判断所述多个种类的所述第一目标分子的工序。

技术领域

本发明涉及目标分子的检测方法及目标分子检测试剂盒。

本申请基于2016年5月19日在日本申请的日本特愿2016-100231号、以及2016年12月13日在日本申请的日本特愿2016-241023号来主张优先权，其内容援引至此。

背景技术

通过定量地检测生物试样中的目标分子，进行疾病的早期发现和用药的效果预测。以往，蛋白的定量通过酶联免疫吸附法(ELISA)等进行，核酸的定量通过实时PCR法等进行。

近年来，出于更早期发现疾病等目的，更高精度地检测目标分子的需求提高。作为高精度地检测目标分子的方法，例如在专利文献1、专利文献2、非专利文献1等中记载了在多个微小区域内进行酶反应的技术。

这些方法被称为数字测量。

数字测量时，将试样溶液分为极大量的微小溶液。然后，将来自各微小溶液的信号二值化，通过仅判别是否存在目标分子，测量目标分子数。根据数字测量，与以往的ELISA或实时PCR法等相比，能够显著提高检测灵敏度和定量性。

在数字测量中，有时使用针对目标分子的单克隆抗体等特异性结合物质对目标分子的存在进行检测。但是，在使用了特异性结合物质的目标分子的检测中，特异性结合物质有时会发生与目标分子具有类似结构的蛋白上的相同表位的误识别、非特异性识别等误识别，目标物质的检测精度降低。

为了解决该问题，例如在专利文献3中记载了下述靶分子的检测方法，该方法包含下述步骤：使靶分子、修饰有与上述靶分子特异性结合的第一抗体的载体、和与上述靶分子特异性结合且标记有具有底物剪切活性的酶的两种以上的第二抗体反应，在上述载体上形成由上述第一抗体、上述靶分子和上述第二抗体构成的复合物的复合物形成步骤，所述第二抗体的上述酶的底物特异性互不相同；使具有上述酶的剪切部位且在该剪切部位的一端侧结合有荧光物质、在另一端侧结合有消光物质的两种以上的底物与所述复合物反应，检测从所述荧光物质发出的荧光的检测步骤，所述底物的所述荧光物质的荧光波长互不相同；以及将荧光波长不同的两种以上的荧光的检测信号作为所述靶分子的检测信号进行处理的分析步骤。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第5551798号公报

专利文献2：日本特表2014-503831号公报

专利文献3：国际公开第2016/047068号小册子

非专利文献

非专利文献1：Kim S.H.，et al.，Large-scale femtoliter droplet array fordigital counting of single biomolecules.，Lab on a Chip，12(23)，4986-4991，2012.

发明内容

发明所要解决的课题

但是，专利文献3所记载的方法存在改良的余地。例如，专利文献3所记载的方法中，酶将底物剪切，在检测荧光的过程中不包含信号放大反应。另外，能够在抗体分子上标记的酶分子的数量也取决于分子的大小，但大多是每1分子抗体数个。因此，为了通过专利文献3所记载的方法检测荧光，需要至少数十分钟的反应时间。