[发明专利]缀合物和缀合试剂

说明书

一种缀合物，其通过接头将蛋白质或肽缀合至治疗、诊断或标记试剂，其中所述接头包括具有以下通式(I)的蛋白质或肽键合部分：其中Pr代表所述蛋白质或肽，每个Nu代表存在于蛋白质或肽中或附着于蛋白质或肽的亲核体，A和B各自独立地代表C_1‑4亚烷基或亚烯基链，并且W'代表吸电子基团或通过还原吸电子基团而得到的基团；并且其中所述接头还包括环糊精。本发明还提供用于制备所述缀合物的试剂。

发明领域

本发明涉及新型缀合物和新型缀合试剂。

发明背景

近年来，许多研究致力于将多种有效负载，例如治疗、诊断和标记试剂缀合至肽和蛋白质以广泛应用。蛋白质或肽本身可具有治疗性质，且/或它可以为结合蛋白。

肽和蛋白质具有作为治疗剂的潜在用途，并且缀合是改善其性质的一种方法。例如，水溶性合成聚合物，特别是聚亚烷基二醇，广泛用于缀合具有治疗活性的肽或蛋白质。通过延长循环时间和降低清除率、降低全身毒性以及在一些情况下显示出提高的临床疗效，已显示这些治疗性缀合物有利地改变了药代动力学。通常将聚乙二醇PEG共价缀合至蛋白质的方法称为“PEG化”。PEG链可以携带有效负载，例如治疗、诊断或标记试剂。虽然已经提出了PEG的替代聚合物，但PEG仍然是主要选择的聚合物。

结合蛋白，特别是抗体或抗体片段，经常被缀合。结合蛋白对靶细胞和分子表面上的特异性标记物的特异性使得它们本身广泛用作治疗或诊断试剂或者作为可包括治疗、诊断或标记试剂的有效负载的载体。此类与标记和报道基团(例如荧光团、放射性同位素和酶)缀合的蛋白质可用于标记和成像用途，而与诸如细胞毒性剂类和化疗药物类药物缀合以产生抗体-药物缀合物(ADCs)则允许靶向递送此类药物至特定组织或结构，例如特定的细胞类型或生长因子，以减少对正常健康组织的影响并显著地降低与化疗相关的副作用。此类缀合物在多种疾病领域中，特别是在癌症中，都具有广泛的潜在治疗用途。

文献中已经报道了许多缀合蛋白质和肽的方法。可能最常用的方法涉及使用基于马来酰亚胺的缀合试剂。此类试剂描述于多篇出版物中，例如WO 2004/060965。Liberatore等人在Bioconj.Chem 1990,1,36-50中以及del Rosario等人在Bioconj.Chem.1990,1,51-59中描述了产生更均匀产物的替代方法，其描述了在蛋白质中，包括在抗体中，可通过二硫键用于交联的试剂的用途。WO 2005/007197描述了一种将聚合物缀合至蛋白质的方法，其使用的新型缀合试剂能与源自蛋白质中的二硫键的两个硫原子缀合以产生新型硫醚缀合物，而WO 2009/047500则描述了同一缀合试剂结合附着于蛋白质的多聚组氨酸标记的用途。WO2010/100430描述了能够通过蛋白质中的二硫键形成单个碳原子桥的试剂。其他与蛋白质缀合有关的文献包括WO 2014/064423、WO2013/190292、WO 2013/190272和EP2260873。

WO 2014/064424描述了特定的ADC，其中药物是美登素且抗体通过二硫键经交联而键合。WO 2014/064423描述了特定的ADC，其中药物是奥瑞斯他汀且抗体通过二硫键经交联而键合。这些文献的实施例中示出的接头含有PEG部分，其中PEG链的一端经由接头的其他部分连接至药物，而PEG链的另一端经由接头的其他部分连接至抗体。这是ADC的常见结构模式。

近年来，缀合物中将有效负载连接至蛋白质或肽的接头的重要性变得越来越明显。通常，要做的关键决定为究竟是需要具有可裂解的接头，即在给予缀合物时降解以释放游离的有效负载的接头，还是不可裂解的接头。另一个关键决定为在接头中是否包含PEG。考虑到这些因素，原则上可以使用任意接头。然而，在实践中，接头结构的变化可导致缀合试剂或所得缀合物在性质上的差异。