[发明专利]选择具有蛋白酶活性的酶的方法

权利要求书

1.一种选择具有蛋白酶活性的多肽的方法，所述方法包括：

(i)将多种合成化合物悬浮在水相中，其中所述合成化合物各自包括：

(a)编码多肽的多核苷酸；

(b)与所述多核苷酸连接的蛋白酶底物；和

(c)与所述多核苷酸连接的选择性标记物；

其中所述水相包括用于所述多肽表达的组分；

(ii)与所述水相形成油包水乳液，其中所述合成化合物在所述乳液的水性液滴中区室化；

(iii)在所述乳液的水性液滴内表达所述多肽，其中水性液滴中具有蛋白酶活性的多肽使所述液滴中的蛋白酶底物水解；和

(iv)分离所述合成化合物，以回收包含蛋白酶底物的合成化合物和/或其中蛋白酶底物已经被水解的合成化合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述多肽包括前肽。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述多种合成化合物包括至少大约10⁶种不同的合成化合物(例如，至少大约10¹⁰、10¹²或10¹⁴种不同的合成化合物)。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述乳液包括至少大约10⁶个水性液滴/mL乳液(例如，至少大约10⁹、10¹²或10¹⁵个水性液滴/mL乳液)。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述乳液中的水性液滴的平均直径为大约0.05μm至大约100μm，包含两端值(例如，大约0.1μm至大约50μm，大约0.2μm至大约25μm，大约0.5μm至大约10μm，或者大约1μm至大约5μm，包含两端值)。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述乳液中的水性液滴的平均体积为大约1阿升至大约1纳升，包含两端值(例如，大约10阿升至大约50毫微微升，或者大约0.5毫微微升至大约10毫微微升)。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述选择性标记物在相对于所述蛋白酶底物远端的位置处与所述多核苷酸连接。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述选择性标记物是亲和标签(例如，生物素)。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述合成化合物各自包括固相(例如，微珠或颗粒)。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述固相与所述蛋白酶底物连接，并且其中所述蛋白酶底物的水解使得所述固相从所述合成化合物释出。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其包括在步骤(iv)之前将水相自油相分离(例如，经由化学诱导的聚结和/或离心)。

12.一种合成化合物，其包括：

(a)编码多肽的多核苷酸；

(b)与所述多核苷酸连接的蛋白酶底物；和

(c)与所述多核苷酸连接的选择性标记物。

13.根据权利要求12所述的合成化合物，其中所述多肽包括前肽。

14.根据权利要求12或13所述的合成化合物，其中所述选择性标记物在相对于所述蛋白酶底物远端的位置处与所述多核苷酸连接。

15.根据权利要求12-14中任一项所述的合成化合物，其中所述选择性标记物是亲和标签(例如，生物素)。

16.根据权利要求12-15中任一项所述的合成化合物，其还包括固相(例如，微珠或颗粒)，其中所述固相与所述蛋白酶底物连接。