[发明专利]呼肠孤病毒科疫苗

说明书

本发明涉及包含多个突变的分离的非洲马瘟病毒(AHSV)ssRNA；用于从所述ssRNA复制疫苗病毒株的互补细胞；来源于所述ssRNA的疫苗病毒株；所述疫苗病毒株和/或分离的ssRNA在对动物接种以抵抗AHSV感染中的用途；包含其的接种疫苗的方法；和包含所述疫苗病毒株和/或所述分离的ssRNA的药物组合物。

本发明涉及包含多个突变的分离的非洲马瘟病毒(AHSV)ssRNA；用于从所述ssRNA复制疫苗病毒株的互补细胞；来源于所述ssRNA的疫苗病毒株；所述疫苗病毒株和/或分离的ssRNA在对动物接种以抵抗AHSV感染中的用途；包含其的接种疫苗的方法；和包含所述疫苗病毒株和/或所述分离的ssRNA的药物组合物。

背景技术

在密切相关的环状病毒(呼肠孤病毒科(Reoviridae))(例如蓝舌病病毒(Bluetongue virus)(BTV)、流行性出血病病毒(EHDV)和非洲马瘟病毒(AHSV))中，已知后者在受感染动物中引起最严重的发病率和死亡率。在易感染的马中，AHSV可引起不同形式的疾病，范围从轻度发热到死亡率达到95-100％的急性发热。虽然AHSV是撒哈拉以南非洲的地方病，但已报道在北非、巴基斯坦、印度、西班牙和葡萄牙偶尔爆发，并且这些爆发已产生了重大的社会和经济影响。前三种环状病毒是由库蠓属(Culicoides)的蠓传播的，这些蠓在整个欧洲和美国也有发现，因此增加了AHSV爆发的潜在地理风险，事实上，BTV和EHDV也有报道。

AHSV的基因组序列与BTV和EHDV不同。仅鉴别出AHSV病毒的9种血清型，即AHSV1-AHSV9。用减毒多价AHSV活疫苗(LAV)接种目前被用于控制非洲的疾病。然而，该疫苗由于不良副作用而被认为是不安全的；它引起病毒血症，并且还具有与野外分离株重配的可能性，从而有将新的病毒血清型引入天然地理位置的风险。

因此，需要合理设计的安全AHSV疫苗。具有挑战性的是，开发安全疫苗可能遇到的障碍是其特性的根本，除了需要安全且有效的疫苗制剂外，疫苗还必须：(i)技术上简单且可重复再现，这对于按比例放大生产至关重要；(ii)经济有效，这直接取决于：每个细胞所产生的病毒样粒子(VLP)的数目、疫苗的异源性质以及下游加工的容易性。遗憾的是，基于纯化蛋白质的亚单位疫苗通常不提供足够且持久的保护，而且它们生产成本高。

AHSV是含有10个双链RNA(dsRNA)区段(S1-S10)的无包膜病毒。外衣壳由两种主要的结构蛋白质VP2和VP5构成。决定血清型的VP2是最易变的病毒蛋白质，是保护性免疫应答的主要靶标。核心粒子由两个同心层组成：表面VP7层和内部VP3层，这两个同心层包封10个dsRNA以及复制酶VP1、VP4和VP6的复合物。BTV10的衣壳蛋白质VP2、VP3、VP5和VP7的序列与EHDV1和AHSV4的序列之间的比较已揭示这些病毒之间的密切关系：内核蛋白质VP3和VP7是最保守的，而最外层蛋白质VP2和VP5是变化最大的。虽然先前对BTV的结构研究已揭示BTV粒子组织的细节，但目前对于AHSV仅报道了VP7(顶部)域的结构，因此对AHSV病毒功能的分析和任何随后基于结构的合理疫苗设计对于AHSV都是不可能的。

在过去十年中，反向遗传学(RG)技术彻底改变了对病毒复制和发病机理的理解，并为疫苗技术的发展做出了巨大贡献。然而，虽然已开发出用于野生型AHSV毒株的RG技术，但它需要显著改善以增加拯救病毒生产的效率。

在本文中，我们公开了突变、有复制能力、无增殖能力的病毒粒子的产生。值得注意的是，在互补细胞系中的传代未揭示会恢复任何突变的ORF的突变区段变化。此外，复制效率接近野生型(wt)AHSV，因此产生用于疫苗开发的显著蛋白质水平。因此，这代表了稳定、优越且有效的疫苗疗法。