[发明专利]用于寡核苷酸纯化的疏水性相互作用色谱法

权利要求书

1.一种用于从含有目标寡核苷酸和产物相关杂质的混合物中分离所述目标寡核苷酸的方法,所述方法包括以下步骤:

a)将盐加入所述混合物中，其中所述盐是硫酸铵；

b)以动态加载容量使稀释的混合物与疏水性吸附剂接触,所述动态加载容量为所述疏水性吸附剂容量的32％至78％，其中所述疏水性吸附剂包含苯基或己基；

c)用盐水溶液洗涤所述疏水性吸附剂；

d)用洗脱溶液洗脱所述目标寡核苷酸；以及

e)收集包含所述目标寡核苷酸的洗脱液；

其中所述产物相关杂质包含至少一种n-1杂质,从而将所述目标寡核苷酸与所述产物相关杂质分离。

2.一种用于从含有目标硫醇化寡核苷酸和产物相关杂质的混合物中分离所述目标寡核苷酸的方法,所述方法包括以下步骤:

a)将盐加入所述混合物中，其中所述盐是硫酸铵；

b)以动态加载容量使稀释的混合物与疏水性吸附剂接触,所述动态加载容量为所述疏水性吸附剂容量的40％至100％，其中所述疏水性吸附剂包含苯基或己基；

c)用盐水溶液洗涤所述疏水性吸附剂；

d)用洗脱溶液洗脱所述目标寡核苷酸；以及

e)收集包含所述目标寡核苷酸的洗脱液；

其中所述产物相关杂质包含至少一种P＝O杂质,从而将所述目标寡核苷酸与所述产物相关杂质分离。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其中将所述盐作为盐水溶液加入所述混合物中,或将所述盐直接溶解到所述混合物中。

4.根据权利要求3所述的方法,其中所述洗涤步骤的流速慢于所述加载流速。

5.根据权利要求4所述的方法,其中所述洗脱溶液选自水、盐水溶液、乙二醇或丙二醇或它们的混合物。

6.根据权利要求5所述的方法,其中延迟所述洗脱物收集,以使得收集的洗脱物不包括产物洗脱峰的前1-25％。

7.根据权利要求6所述的方法,其中延迟所述洗脱物收集,以使得收集的洗脱物不包括所述产物洗脱峰的前10-25％。

8.根据权利要求6所述的方法,其中延迟所述洗脱物收集,以使得收集的洗脱物不包括所述产物洗脱峰的前5-10％。

9.根据权利要求8所述的方法,其中所述收集的洗脱物不包括所述产物洗脱峰的最后1-25％。

10.根据权利要求9所述的方法,其中所述收集的洗脱物不包括所述产物洗脱峰的最后5-10％。

11.根据权利要求9所述的方法,其中所述收集的洗脱物不包括所述产物洗脱峰的最后10-25％。

12.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述疏水性吸附剂在至少15cm的床高处填充。

13.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述目标寡核苷酸包含15至25个核苷酸。

14.根据权利要求13所述的方法,其中所述目标寡核苷酸包含独立地选自由以下项组成的组的核碱基:腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶(5-甲基尿嘧啶)、胞嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-甲基胞嘧啶、7-脱氮嘌呤和5-羟甲基胞嘧啶。

15.根据权利要求14所述的方法,其中所述目标寡核苷酸包含独立地选自由以下项组成的组的核碱基:腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶(5-甲基尿嘧啶)和5-甲基胞嘧啶。