[发明专利]三维培养皮肤片、用于其制造的细胞培养容器和该三维培养皮肤片的制造方法

说明书

本发明提供具有厚度的三维培养皮肤片。本发明提供至少包含表皮细胞，并在基底部的至少一部分具有凹凸的三维培养皮肤片。此外，本发明提供在培养表面的至少一部分具有多孔性膜，并用于制造三维培养皮肤片的细胞培养容器，上述多孔性膜具备用于在三维培养皮肤片的基底部形成凹凸的凸部。进一步，本发明提供使用该细胞培养容器制造三维培养皮肤片的制造方法。

技术领域

本发明涉及三维培养皮肤片。此外，本发明涉及用于制造三维培养皮肤片的细胞培养容器。此外，本发明涉及三维培养皮肤片的制造方法。本申请基于2016年6月24日提出的日本申请(特愿2016-125843号)和2016年12月28日提出的日本申请(特愿2016-256778号)的优先权。

背景技术

皮肤是将生物体内与生物体外的环境分开的覆盖体表的器官。皮肤作为物理性屏障起作用，避免干燥、有害物质向生物体内侵入，对生命的维持发挥不可缺少的作用。

高等脊椎动物的皮肤如果从最外层起大致区分则由表皮、真皮、皮下组织的层形成。已知在表皮与真皮的界面具有起伏，该起伏随着老化而平坦化(例如，参照非专利文献1。)。表皮主要由被称为角质形成细胞的细胞构成，在表皮的最深部(基底层)角质形成细胞分裂，同时一边向上层分化成棘层、颗粒层、进而角质层，一边向表面移动，不久变成污垢脱落。该循环在人的情况下以大致4周进行。

尝试了构建在生物体外模仿了表皮结构及其功能的各种培养皮肤模型，也已经有市售品(例如，参照专利文献1、非专利文献2、和非专利文献3)。此外，进行了下述尝试：在具有通过光刻而制作的槽的模型中注入胶原凝胶，在对该胶原凝胶接种成纤维细胞而制作的支架上进一步接种角质形成细胞而制作三维培养皮肤模型(专利文献2、非专利文献4)，使用在培养表面设置有起伏的细胞培养器材，研究对原代人角质形成细胞所包含的干细胞的配置的影响(非专利文献5)，也使用由生物降解性高分子脱乙酰壳多糖、聚己内酯或其混合物形成的细胞培养器材表面，研究了对人角质形成细胞的分化的影响(非专利文献6)。此外，也进行了下述尝试：在从由人的捐献体采集的皮肤组织除去了上皮组织和细胞成分的人无细胞化真皮基质上，接种角质形成细胞，制作三维培养皮肤(非专利文献7)。

这样的培养皮肤模型在化妆品、对皮肤涂抹的药剂的安全性试验、基础研究等中使用，作为代替动物的模型而受到关注，但是仍然得不到具有与人的皮肤同等水平的厚度和屏障功能的培养皮肤模型。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2012-235921号公报

专利文献2：美国专利申请公开第2011/0171180号说明书

非专利文献

非专利文献1:Lavker R.M.Structural alterations in exposed andunexposed aged skin.J Invest Dermatol.1979Jul；73(1)：59-66.

非专利文献2:Bell E.，et al.，The reconstitution of living skin.J InvestDermatol.1983Jul；81(1Suppl)：2s-10s.

非专利文献3:“ケラチノサイト三次元培養スターターキット”，[online]，2009年5月11日，フナコシ株式会社，[2016年6月16日检索]，网站＜URL：http：//www.funakoshi.co.jp/contents/3571＞