[发明专利]源自多能性干细胞的胰腺祖细胞的纯化法及其扩增法在审
| 申请号： | 201780039853.8 | 申请日： | 2017-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN109415689A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 岩田博夫;小长谷周平 | 申请（专利权）人： | 武田药品工业株式会社 |
| 主分类号： | C12N5/00 | 分类号： | C12N5/00;C12N5/0735;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京坤瑞律师事务所 11494 | 代理人： | 张平元 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 日本;JP |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 祖细胞 胰腺 多能性干细胞 胰岛细胞 冻结 制备 成纤维细胞生长因子 上皮生长因子 分化诱导 三维培养 培养基 激动剂 保存 扩增 | ||
1.一种源自多能性干细胞的胰腺祖细胞的培养方法，其包括：
(A)在含有(1)属于上皮生长因子(EGF)家族的因子和/或属于成纤维细胞生长因子(FGF)家族的因子、以及(2)Wnt激动剂的培养基中，三维培养源自多能性干细胞的胰腺祖细胞的工序。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述Wnt激动剂为属于R-脊椎蛋白家族的蛋白质和/或GSK抑制剂。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述(1)属于EGF家族的因子和/或属于FGF家族的因子为EGF，所述(2)Wnt激动剂为R-脊椎蛋白1。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述培养基为无血清培养基。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述培养是在不存在饲养细胞下的培养。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，所述多能性干细胞为iPS细胞或ES细胞。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，所述多能性干细胞为人来源。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，所述三维培养为胰腺祖细胞的聚集体的悬浮培养。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其还包括(B)将在工序A中得到的胰腺祖细胞进行传代培养的工序。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的方法，其用于胰腺祖细胞的纯化。
11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其还包括(C)制备iPS细胞的工序，并在工序A中使用源自该iPS细胞的胰腺祖细胞。
12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其还包括(D)将多能性干细胞分化诱导成胰腺祖细胞的工序，并在工序A中使用该胰腺祖细胞。
13.一种由源自多能性干细胞的胰腺祖细胞制备胰岛细胞的方法，，所述方法包括(E)将利用权利要求1～12中任一项所述的方法培养的胰腺祖细胞分化诱导成胰岛细胞的工序。
14.一种源自多能性干细胞的胰腺祖细胞的冻结保存方法，所述方法包括(F)将利用权利要求1～12中任一项所述的方法培养的胰腺祖细胞冻结的工序。
15.一种源自多能性干细胞的胰腺祖细胞的培养用培养基，，所述培养基含有(1)属于EGF家族的因子和/或属于FGF家族的因子、以及(2)Wnt激动剂。
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