[发明专利]变体黄病毒包膜序列及其用途

说明书

本发明涉及黄病毒E蛋白融合环的分离的重组类似物，其包含在天然黄病毒E蛋白融合环序列中不存在的用于N‑联聚糖的至少一个糖基化位点，其中该至少一个糖基化位点5是N‑联糖基化序列子(Asn‑X‑Ser/Thr),并且该序列子的Asn(N)残基占据该天然黄病毒E蛋白融合环氨基酸序列的98位至110位(DRGWGNGCGLFGK)中的任一位置，其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸残基，并且Ser/Thr表示丝氨酸或苏氨酸残基。

技术领域

本发明涉及黄病毒(例如，登革热(dengue)或寨卡(Zika)病毒)的野生型E蛋白的核酸和蛋白质变体以及对这些核酸和蛋白质变体具有特异性的结合分子(例如互补核酸或抗原结合分子，例如抗体)；本发明还涉及与上述相关、具体而言用于黄病毒感染的诊断以及用于针对黄病毒感染进行免疫的疫苗的组合物(例如治疗组合物、预防组合物或诊断组合物)、试剂盒、多组分试剂盒(kit-of-parts)、方法和用途。

背景技术

黄病毒科是一个正义单链包膜RNA病毒科。它们存在于节肢动物(主要是蜱和蚊子)中，并且可感染人类。该病毒科成员属于单一属黄病毒属，并且导致全世界的广泛发病和死亡。一些蚊子传播的病毒包括：登革热、寨卡病毒、黄热病、日本脑炎和西尼罗病毒。其他黄病毒通过蜱传播并且诱发脑炎和出血性疾病：蜱传脑炎(TBE)、科萨努尔森林病(Kyasanur Forest Disease，KFD)和奥克赫默病(Alkhurma disease)以及鄂木斯克出血热(Omsk hemorrhagic fever)。

黄病毒是编码十种病毒蛋白的小球形病毒粒子：三种结构蛋白(衣壳、前体膜膜和包膜(E))和七种非结构蛋白。E蛋白在病毒附着至细胞、与内体区室融合以及调节宿主免疫应答中具有重要作用。病毒E蛋白的胞外结构域折叠成三个结构上不同的结构域(DI、DII和DIII)，在病毒粒子的表面上形成头对尾同源二聚体。DI是组织整个E蛋白结构的中心结构域。DII由从DI突出的两个延伸环形成，并且位于二聚体中相邻E蛋白的DI和DIII界面的口袋中。位于DII远端的是称为融合环的富甘氨酸疏水序列，其包含残基98-110，并且在黄病毒中高度保守。此区域涉及pH依赖性II型融合事件；在此过程中，该区域被暴露并向外重新定向，使该区域可用于膜接触。DIII形成七链Ig样折叠，是成熟病毒粒子中位于膜最远端的结构域，并且已被认为参与受体结合。茎区将胞外结构域连接到对于病毒粒子组装和融合很重要的双螺旋C-末端跨膜锚定物。

登革热疾病是由登革热病毒(DENV)引起的由蚊子传播的病毒感染，登革热病毒是全世界最重要的人类病原体之一。感染产生一种全身性疾病，其结果广泛，从无症状/轻度发热性疾病(登革热，DF)到严重的血浆渗漏和出血表现(登革出血热，DHF)，可进一步演变成潜在的致命疾病(登革休克综合征，DSS)。DENV由伊蚊属(Aedes spp.)蚊子传播并且广泛分布于世界的热带和亚热带地区。据估计，有100多个国家的约30亿人有感染风险，每年报道超过3亿人感染，50万次DHF表现发作和2万人死亡。登革热疾病的传播和影响使世界卫生组织将其归类为“世界上最重要的蚊媒病毒病”。

迄今已鉴定出四种不同的登革热病毒血清型(DENV1、DENV2、DENV3和DENV4)；每种血清型都是对人类致病的。任何一种血清型的感染诱导针对该特定血清型的终身免疫，对其他三种血清型仅具有短暂的交叉保护。登革热感染的严重表现与涉及不同病毒血清型的继发感染有关；这是通过称为抗体依赖性感染增强(ADE)的机制发生的。在ADE中，通过交叉反应但较弱或非中和的抗体识别病毒颗粒，导致单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞(人类登革热病毒感染的主要靶标)对未成熟或不完全中和病毒的Fc受体介导的摄取增加，导致感染性增加和患者临床状况恶化。ADE是登革热疫苗开发中的关键考虑因素，因为不引发所有四种血清型的完全中和抗体的免疫原可能导致疾病，而不是预防感染。鉴于缺乏针对感染的有效治疗和对人类健康的风险，需要开发一种有效的疫苗，其提供保护性应答而不会引起抗体依赖性增强。