[发明专利]抗NRP1抗体筛选方法在审
| 申请号： | 201780041972.7 | 申请日： | 2017-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN109416363A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 南都铉;李在铉 | 申请（专利权）人： | 社会福祉法人三星生命公益财团 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/53;G01N33/50;G01N33/574;A01K67/027;A61K39/395 |
| 代理公司： | 北京坤瑞律师事务所 11494 | 代理人： | 陈桉 |
| 地址： | 韩国首*** | 国省代码： | 韩国;KR |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肿瘤球体 抗原结合片段 动物模型 患者来源 抗体 筛选 抗体筛选 体外 文本 体内 移植 | ||
1.一种筛选与NRP1结合的抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括以下步骤：
(i)用包含抗体或其抗原结合片段的文库处理表达NRP1的患者来源的肿瘤球体，以筛选与NRP1结合的抗体或其抗原结合片段；
(ii)用其中不表达NRP1的患者来源的肿瘤球体处理筛选的抗体或其抗原结合片段；并且
(iii)从步骤(i)中筛选的抗体或其抗原结合片段中分离或去除与步骤(ii)的患者来源的肿瘤球体结合的抗体或其抗原结合片段。
2.一种筛选与NRP1结合的抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括以下步骤：
(i)用包含抗体或其抗原结合片段的文库处理表达NRP1的患者来源的肿瘤球体，从而第一次筛选与NRP1结合的抗体或其抗原结合片段；
(ii)用第一次筛选的抗体或其抗原结合片段处理不表达NRP1的患者来源的肿瘤球体；
(iii)向移植有过表达NRP1的患者来源的肿瘤球体的动物模型给予抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段是通过从步骤(i)中筛选的抗体或其抗原结合片段分离/去除与步骤(ii)的患者来源的肿瘤球体结合的抗体或其抗原结合片段而获得，从而第二次筛选与NRP1结合的抗体或抗原结合片段；并且
(iv)从第二次筛选的抗体或其抗原结合片段中分离或去除与NRP1以外的抗原结合的抗体或其抗原结合片段。
3.权利要求1或2的方法，其中该抗体或其抗原结合片段被内化到细胞中。
4.权利要求1或2的方法，其中通过进行以下步骤获得过表达NRP1的患者来源的肿瘤球体：
(a)解离分离的癌症患者来源的癌组织，并从解离的组织中收集细胞部分；并且
(b)用蛋白酶处理收集的细胞部分，然后过滤、离心和悬浮，由此获得单细胞。
5.权利要求2的方法，其中移植有过表达NRP1的患者来源的肿瘤球体的该动物模型是免疫缺陷小鼠。
6.权利要求5的方法，其中该免疫缺陷小鼠是裸鼠、NOD(非肥胖糖尿病)小鼠、SCID(重症联合免疫缺陷)小鼠、NOD-SCID小鼠或NOG(NOD/SCID I12rg-/-)小鼠。
7.权利要求1或2的方法，其还包括将通过该方法筛选的抗体或其抗原结合片段转化为IgG形式的步骤。
8.一种抗体或其抗原结合片段，其通过权利要求1或2的方法筛选，并且与NRP1特异性地结合。
9.一种用于预防或治疗癌症的组合物，其包含权利要求8的抗体或其抗原结合片段。
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