[发明专利]用于制备多跨膜蛋白的方法和平台

权利要求书

1.一种针对经修饰的多跨膜多肽筛选治疗剂的方法，其包括：

a)通过随机诱变方法生成经修饰的多跨膜多肽文库；

b)生成第一组表达载体，其中每个表达载体包含：

第一多核苷酸，其编码来自步骤a)的所述文库的经修饰的多跨膜多肽；

第一选择标记基因，其可操作地连接至所述多核苷酸的C末端；以及

可选的第二选择标记基因，其可操作地连接至所述多核苷酸的N末端；

c)在存在或不存在至少一种选择剂的情况下，在第一多个宿主细胞中表达所述第一组表达载体，以针对一组稳定折叠的多跨膜多肽进行选择；

d)生成生产载体，所述生产载体包含第二多核苷酸，该第二多核苷酸编码来自步骤c)中鉴定的那组稳定折叠的多跨膜多肽中的稳定折叠的多跨膜多肽；

e)在第二多个宿主细胞中表达所述生产载体，其中所述宿主细胞是生产宿主细胞；

f)将由步骤e)的所述生产载体生成的多跨膜多肽产物与治疗剂一起温育；以及

g)检测所述多跨膜多肽产物与所述治疗剂之间的结合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述治疗剂是小分子或多肽。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述小分子是药物或小分子片段。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述多肽是抗体或其结合片段。

5.根j据权利要求4所述的方法，其中所述抗体或其结合片段包括人源化抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价Fab’、二价Fab2、单链可变片段(scFv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单结构域抗体(sdAb)或骆驼抗体或其结合片段。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述抗体或其结合片段通过噬菌体展示或酵母展示方法产生。

7.根据权利要求1所述的方法，其中步骤f)中的温育进一步包括在与所述治疗剂一起温育之前将所述多跨膜多肽产物固定化在纳米颗粒上。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述纳米颗粒包括顺磁性纳米颗粒、超顺磁性纳米颗粒、金属纳米颗粒或无机纳米管。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一选择标记基因选择防止所述多跨膜多肽的过早截短，并且/或者促进所述多跨膜多肽的稳定且正确的折叠。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二选择标记基因促进所述多跨膜多肽的稳定且正确的折叠。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述经修饰的多跨膜多肽包括质膜蛋白、核膜蛋白、外周膜蛋白、细胞内膜蛋白、转运蛋白、通道蛋白、黏附素、移位酶或受体。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述经修饰的多跨膜多肽是经修饰的离子通道蛋白。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述经修饰的离子通道蛋白是经修饰的TRPV3、KCa3.1或TRPC6。

14.根据权利要求11所述的方法，其中所述经修饰的多跨膜多肽是经修饰的G蛋白偶联受体(GPCR)。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述经修饰的GPCR是经修饰的CCR7、CCR10、GPR55、NTR1、EP2或EP4受体。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述经修饰的GPCR包含约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50个或更多个经修饰的氨基酸残基。