[发明专利]用于双胎输血综合征的产前诊断的生物标志物

说明书

双胎输血综合征(TTTS)是这样的病况，其能够发生在10％至15％(全世界约150,000例/年)的单绒毛膜双胎怀孕中。因此，本申请提供了新的基于分子的方法，其允许以快速和非侵入性方式早期筛选该综合征。使用实时定量PCR，该方法旨在定量母体血浆中HBB(新的TTTS生物标志物)的表达。在具有该病况的怀孕女性中，当与非怀孕女性以及没有病理学的具有单胎和双胎怀孕的怀孕女性相比时，该生物标志物显著减少。该方法，如果应用于具有单绒毛膜双胎怀孕的所有女性，将允许早期筛选TTTS，有益于母体和胎儿，其可以更快速地利用有效的治疗，具有胎儿的存活的可预测的改善。

技术领域

本专利申请涉及检测适用于所有单绒毛膜双胎怀孕的双胎输血综合征(TTTS)的新方法。

背景技术

单绒毛膜胎盘的双胎怀孕具有相对恒定的发生率(～100万次怀孕/年)，并且不像双绒毛膜怀孕那样受遗传、种族或辅助生殖技术的影响。多胎怀孕中的产前和围产期发病率和死亡率明显优于单胎怀孕，然而，根据绒毛膜性，对于母体和胎儿可以发生许多并发症。

双胎输血综合征(TTTS)是一种严重的医学病况，其发生在10至15％的具有单绒毛膜/双羊膜胎盘的双胎怀孕中。TTTS与胎儿和围产期死亡率的高风险(范围为60％至100％)以及在约20％至30％的存活胎儿中严重的神经学后遗症的发生相关。诊断方法由怀孕的第2和第3个三个月期的超声评估组成。然而，TTTS的发病率可能被低估，因为单绒毛膜怀孕中的一些胎儿死亡发生在早期怀孕并且可能是由于未诊断到的TTTS病例。

尽管通过超声检查很好地表征，但该综合征的病因仍然理解较少，并且双胎之间胎盘吻合的发生似乎是TTTS的病理生理学的关键。胎儿之间的血液动力学失衡导致供体双胎的灌注不足和受体双胎的过度灌注。因此，所得的临床表现包括供体双胎中的血容量不足、生长受限、高心输出量和羊水过少，以及受体双胎中的体液超负荷、充血性心力衰竭和羊水过多。当TTTS发生在早期孕龄时，其预后似乎比怀孕晚期更差。胎盘吻合的激光消融，以便将单绒毛膜胎盘转化为功能性双绒毛膜胎盘，目前是怀孕的16周和26周之间TTTS最适当的治疗方法，并且如果不治疗，最可能的结果将是双胎的死亡。然而，治疗性干预减少、但不消除存活胎儿的神经发育中的后遗症的风险，因为已经患有许多严重并发症时多次诊断到TTTS。简而言之，使得能够早期鉴定TTTS的新方法将代表其治疗的额外价值，并将导致胎儿死亡率或存活双胎中的后遗症的风险降低。

概述

本申请涉及检测生物样品中的HBB基因用于早期鉴定双胎输血综合征的方法，其包括以下步骤：

-在第一季度的生物化学筛选时或另一次怀孕时采集母体血液；通过血浆分离和从母体血液提取无细胞RNA(cfRNA)来获得RNA以进行测试；

-将cfRNA转化为cDNA；制备用于PCR的组合物，其包含具有序列SEQ ID nr.1至SEQID nr.6的引物和探针，向其中添加待测试的cDNA；

-基于扩增曲线分析结果并定量cDNA样品中的HBB和18S(内源对照)基因。

在一个实施方案中，进行该方法，直至怀孕的第16周。

在另一个实施方案中，待测试的RNA的样品获得自羊水或血浆。

在一个实施方案中，获得结果，直至在收集样品后48小时。

一般描述

本申请涉及引物组和探针序列(SEQ ID nr.1至SEQ ID nr.6)，其用于扩增和杂交来自生物样品的DNA，其被设计为在检测HBB转录物中呈现高特异性。

由于这些转录物在TTTS病例中以较低水平存在，因此这些遗传探针和引物允许开发高度灵敏的方法用于TTTS检测。