[发明专利]具有窄荧光发射的氢化卟啉珠粒

说明书

提供具有聚合物基质和与其缔合的至少一种卟啉大环的荧光微粒和/或纳米颗粒。在一些实施方式中，与本发明公开的荧光微粒和/或纳米颗粒相关的卟啉大环选自：卟啉(包括17,18‑didehydrophorbines)，二氢卟酚(包括phorbines)，菌绿素(包括bacteriophorbines)和异菌绿素(包括含有稠合“E”环的异菌绿素)。在一些实施方式中，卟啉大环具有选自式I和II的结构。还提供了由多种不同的荧光微粒和/或纳米颗粒组成的群，制备方法和使用它们的方法，可分别检测的荧光微粒和/或纳米颗粒的组和制备和使用它们的方法，包含卟啉大环的，与颗粒缀合的二合体，及其使用方法来校准多激光流式细胞仪，对准和/或校准共聚焦荧光显微镜，和/或差异标记细胞和/或其他生物分子，和生物分子如抗体，其片段和衍生物(其与本发明公开的荧光微粒和/或纳米颗粒共价缀合的，和/或与本发明公开的包含卟啉大环的二合体共价缀合的)。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年6月10日提交的美国临时专利申请序列号62/348,532的权益，其公开内容通过引用整体并入本文。

技术领域

本发明公开的主题涉及包含一种或多种卟啉大环，任选地一种或多种二氢卟酚(chlorins)，菌绿素(bacteriochlorins)和/或异菌绿素(isobacteriochlorins)的组合物，以及使用其标记和/或以其检测生物分子和/或细胞的方法。具体地说，涉及包含本发明公开的卟啉大环，分子和载体如纳米颗粒和微粒(其已经用本发明公开的卟啉大环标记)的组合物，以及使用其标记和/或检测靶的方法。

背景技术

基于荧光的多色流式细胞仪(PFC)是现代免疫学和生命科学研究中的关键分析技术。PFC特别适用于真核细胞的分析和免疫表型分析，用于研究和诊断目的，它使免疫细胞亚群和功能的分析越来越复杂。最初由20世纪80年代艾滋病病毒研究的需求驱动，它从早期的三色T细胞亚群测量(CDC，1982)发展到HIV阳性患者(其中疾病进展，细胞谱系，和疫苗应答因子全部可用PFC检测(Chattopadhyay&Roederer，2010))的复杂多标记研究。除免疫疾病外，PFC的临床应用包括白血病和淋巴瘤免疫表型分型(现在使用8-10种颜色；参见例如，Craig&Foon,2008；Peters&Ansari,2011)和用于移植交叉匹配的HLA分型。

对更高复用能力的需求不断增加，再加上光学和激光的改进，推动了新的高参数流式细胞仪的推出，包括Becton Dickinson的50色FACSYMPHONY^TM品牌高速细胞分析仪和Bio-Rad的28色ZE5^TM品牌细胞分析仪。然而，这些和以前仪器上的PFC多路复用能力目前受到现有染料的宽光谱带宽的阻碍，导致宽的和重叠的发射谱，这严重限制了这些新器件充分利用的功能的能力。广泛和重叠的发射减少了可由给定激光器分析的光谱可分辨颜色的数量。用于PFC的当前染料需要使用次优带通滤波器，预分析实验和补偿(重叠校正)。这些实践导致荧光灵敏度降低并产生诸如“扩散”之类的伪影。例如，即使使用原型50色仪器，领先的PFC研究人员也只能实现30参数面板(Chattopadhyay等，2015)。因此，迫切需要用于高参数PFC板的新染料，用于诸如但不限于疫苗和药物开发，传染病研究和肿瘤学的领域。特别地，不仅存在对至少二十(20)个或更多个新荧光团的需求，同时且不断增加的对新的非常窄的发射，光谱上不同的荧光团的需要。

发明内容

该发明内容列出了本公开主题的若干实施方式，并且在许多情况下列出了这些实施方式的变型和替换。该发明内容仅仅是众多不同的示例实施方式。提及给定实施方式的一个或多个代表性特征同样是示例性的。这样的实施方式通常可以存在或不存在所提及的特征；同样地，这些特征可以应用于本公开主题的其他实施方式，无论是否在本概述中列出。为避免过度重复，本概述未列出或建议此类功能的所有可能组合。