[发明专利]改善的丝状真菌宿主

权利要求书

1.一种产生和分泌异源目的多肽的丝状真菌宿主细胞，所述突变宿主细胞包含并表达编码经修饰的IreA多肽或其同源物的突变的ireA基因或其同源物，所述经修饰的IreA多肽或其同源物在对应于SEQ ID NO:16中示出的黑曲霉IreA氨基酸序列中的位置81和84的位置处包含氨基酸取代。

2.如权利要求1所述的宿主细胞，该宿主细胞属于选自下组的属，该组由以下组成：枝顶孢属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属、隐球菌属、线黑粉菌科、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属、瘤胃壶菌属、侧耳属、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属和木霉属。

3.如权利要求2所述的宿主细胞，该宿主细胞是曲霉属细胞；优选地是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉或米曲霉细胞。

4.如任一项前述权利要求所述的宿主细胞，其中该分泌的目的多肽是酶；优选地，该酶是水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶或转移酶，例如氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、几丁质酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、内切葡聚糖酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、变聚糖酶、氧化酶、果胶分解酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、或β-木糖苷酶。

5.如任一项前述权利要求所述的宿主细胞，其中该突变的ireA基因或其同源物的核苷酸序列与SEQ ID NO:17中示出的黑曲霉变体ireA核苷酸序列或SEQ ID NO:18中示出的其cDNA核苷酸序列具有至少70％同一性。

6.如任一项前述权利要求所述的宿主细胞，其中该突变的ireA基因或其同源物的核苷酸序列编码变体IreA多肽或其同源物，该变体IreA多肽或其同源物在对应于SEQ ID NO:16中示出的黑曲霉IreA氨基酸序列中的位置81和84的位置处包含丙氨酸残基的氨基酸取代；优选地，这些丙氨酸残基被苏氨酸残基取代。

7.如任一项前述权利要求所述的宿主细胞，其中该经修饰的IreA多肽或其同源物在对应于SEQ ID NO:16中示出的黑曲霉IreA氨基酸序列中的位置81和84的位置处包含丙氨酸残基的氨基酸取代；优选地，这些丙氨酸残基被苏氨酸残基取代。

8.如任一项前述权利要求所述的宿主细胞，其中该经修饰的IreA多肽包含与SEQ IDNO:19具有至少70％同一性的氨基酸序列。

9.一种产生目的多肽的方法，所述方法包括以下步骤：

a)在适于产生和分泌该多肽的条件下培养如前述权利要求中任一项所定义的丝状真菌宿主细胞；和任选地

b)回收该目的多肽。

10.一种改善丝状真菌宿主细胞中分泌的目的多肽的生产力或产率的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供丝状真菌宿主细胞，该丝状真菌宿主细胞包含并表达编码IreA多肽或其同源物的ireA基因或其同源物；和

b)使该ireA基因或其同源物突变，以提供编码经修饰的IreA多肽或其同源物的突变的ireA基因或其同源物，所述经修饰的IreA多肽或其同源物在对应于SEQ ID NO:16中示出的黑曲霉IreA氨基酸序列中的位置81和84的位置处包含氨基酸取代。