[发明专利]使用等离子体在植物细胞内导入物质的方法

说明书

发现了通过将植物细胞用等离子体处理后，与物质接触，从而无论该细胞的来源植物和组织的种类如何，都能够对该细胞简便且高效率地导入物质，并且不引起损伤。

技术领域

本发明涉及使用等离子体在植物细胞内导入蛋白质、核酸等物质的方法。

背景技术

将蛋白质、核酸等物质导入细胞内，不仅对于基础研究，对于各种产业用途也是非常有意义的。

关于对哺乳动物细胞的物质导入，已经确立了利用细胞的胞吞作用、参与微生物的细胞内侵入的细胞透过性因子等的方法，被广泛使用。另外各种转染试剂有市售，通过适宜选择这些市售试剂，能够将所述物质导入哺乳动物细胞。

另一方面，关于植物细胞，这样的转染法不大有效，导入所述物质是困难的。认为这是因为，植物细胞被包含纤维素的强韧的细胞壁包围，因而该细胞壁成为物质导入的阻碍。

关于这样的对植物细胞的物质导入，尝试了如下方法：预先用纤维素酶等酶处理细胞壁的方法(原生质体法)、使用微小的注射器在细胞内导入物质的方法(显微注射法)；将金属微粒子用物质包覆，将其打入细胞内的方法(基因枪法)；用电在细胞膜上开孔，使物质流入细胞内的方法(电穿孔法)。

然而，为了通过这些方法进行导入，需要对每种植物研究适当的条件，尚未确立导入条件的植物种也较多。进而，利用这些方法的导入是复杂且花费工夫的操作，需要时间。另外在导入效率方面也缺乏，进而对作为导入对象的植物细胞带来伤害(损伤)。另外，在原生质体法中，原生质体的分离困难，进而其培养、由其在分化成个体困难的情况也较多。因此，鉴于这些问题点，需要能够对植物细胞无论其来源的植物和组织的种类如何，都能够不带来损伤、简便且高效率地导入物质的方法，现状是尚未确立这样的方法。

此外，等离子体处理、特别是大气压非热等离子体处理在各种领域，例如，制造业、制药业、环境控制中受到关注。实际上本发明者们已经证实了该等离子体处理对聚酰亚胺膜表面的亲水处理有效。另外，也报告了通过大气压等离子体能够分解麻醉气体和有毒化学药品。进而，关于对生物的效果，也已经表明通过大气压非热等离子体能够将细菌、生物体分子灭活。

另外，关于使用等离子体处理向细胞的物质导入，报告了通过在物质存在下对哺乳动物细胞照射等离子体，从而将该物质导入该细胞内(专利文献1和2)。此外，专利文献2中显示，该等离子体处理通常对细胞带来损伤，例如该文献中还显示照射后的细胞生存数变为一半以下(参照专利文献2的[0076]栏的记载)。另外该文献中还显示在利用等离子体处理向哺乳动物细胞导入蛋白质时，在CPP存在下其导入效率被促进(请参照专利文献2的[0082]栏的记载)。

然而，关于植物细胞，如上所述，现状是尚未确立无论其来源的植物和组织的种类如何，都能够不带来损伤、简便且高效率地对植物细胞导入物质的方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开2002/064767号

专利文献2：国际公开2011/148996号

发明内容

发明要解决的课题

本发明是鉴于上述现有技术所存在的课题而做出的，目的是提供对植物细胞无论其来源植物和组织的种类如何，都能够不带来损伤、简便且高效率地导入物质的方法。

用于解决课题的手段