[发明专利]具有含肟键联的因子VIII部分的轭合物

说明书

本披露提供了轭合物，这些轭合物包含经由含肟键联共价附接至水溶性聚合物，例如像聚乙二醇聚合物的因子VIII部分。还提供了用于制备和用于给予此类轭合物的方法，以及可用于制备这些主题轭合物的水溶性聚合物羟胺试剂，等等。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年7月22日提交的美国临时专利申请号62/365,836的优先权的权益，该申请通过引用以其全部内容结合在此。

技术领域

本披露总体上涉及水溶性聚合物与因子VIII部分的轭合物，其中该因子VIII部分与该水溶性聚合物之间的键联包含肟(～CH＝N-O～)。更具体地，诸如聚乙二醇的水溶性聚合物经由肟键联共价附接至因子VIII分子的氧化碳水化合物部分上。此外，除其他事项之外，在此提供了用于合成这些轭合物的方法、用于纯化这些轭合物的方法、以及新的聚合物-羟胺试剂，等等。

背景技术

科学家和临床医师在尝试将活性剂开发成适合向患者递送的形式时面临许多挑战。例如，为多肽的活性剂经常经由注射而不是口服来递送。以此方式，将多肽引入体循环中，而不需要暴露于胃的蛋白水解环境。然而，多肽的注射具有若干缺点。例如，许多多肽具有相对较短的半衰期，从而需要重复注射，这些重复注射经常是不方便且痛苦的。此外，一些多肽可引发一种或多种免疫应答，结果是患者的免疫系统试图破坏或以其他方式中和免疫原性多肽。当然，一旦多肽被破坏或以其他方式被中和，多肽就不能发挥它的预期药效动力学活性。因此，即使在通过注射给予这些药剂时，诸如多肽的活性剂的递送经常也是有问题的。

在解决经由注射递送活性剂的问题方面已经取得了一些成功。已采用多种技术来延长蛋白质的半衰期，这些技术包括白蛋白的遗传融合(Schulte,S.(2011),ThrombosisResearch[血栓形成研究]128增刊1,S9-12)或抗体的Fc部分的遗传融合(Schulte,S.(2011),Thrombosis Research[血栓形成研究]128增刊1,S9-12；Powell,J.S.等人,(2012),Blood[血液]119,3031-3037)、与脂质体非共价缔合(Powell,J.S.等人,(2008)JThromb Haemost[血栓形成与止血杂志]6,277-283)以及与水溶性聚合物轭合，这些水溶性聚合物诸如聚乙二醇(Turecek,P.L.等人,Hamostaseologie[止血法]32增刊1,S29-38；Turecek,P.L.等人,(2016),J.Pharm.Sci[药物科学杂志].105,460-475)、唾液酸(Bader,R.A.,和Wardwell,P.R.(2014)Therapeutic delivery[治疗性递送]5,235-237)、葡聚糖(Caliceti,P.等人,(2003)Bioconjugate Chemistry[生物物化学]14,899-908)和羟乙基淀粉(Baldwin,J.E.等人,(1981)Tetrahedron[四面体]37,1723-1726)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(Kaneda,Y.等人,(2004)Biomaterials[生物材料]25,3259-3266)等。例如，将活性剂轭合至水溶性聚合物已经产生了具有降低的免疫原性和抗原性的聚合物-活性剂轭合物。此外，这些聚合物-活性剂轭合物与它们的未轭合的对应物相比经常具有大大增加的半衰期，这是由于通过肾的清除率降低和/或在体循环中的酶降解减少。由于具有更长的半衰期，聚合物-活性剂轭合物需要更低频率的给药，这进而减少了疼痛注射和医疗保健专业人员的不方便随访的总体次数。此外，仅少量可溶的活性剂在轭合至水溶性聚合物时可展现水溶性的显著增加。