[发明专利]通过位置同位素辨别进行的有氧糖酵解确定

权利要求书

1.在包含细胞的样品中确定有氧糖酵解率的非诊断目的的体外方法，其包括：

a）提供包含含有哺乳动物细胞之样品和经[1-¹³C]标记葡萄糖的混合物；

b）使用基于亲水相互作用液相色谱（HILIC）的液相色谱-质谱（LC-MS）在所述混合物中测量所述经[1-¹³C]标记葡萄糖向经[3-¹³C]标记乳酸的转化；以及

c）基于所述混合物中所述经[3-¹³C]标记乳酸的量、所述经[1-¹³C]标记葡萄糖向所述经[3-¹³C]标记乳酸的转化率、或者所述经[3-¹³C]标记乳酸与未经标记乳酸之量的比值来确定所述样品中的有氧糖酵解率，其中所述混合物中所述经[1-¹³C]标记葡萄糖向所述经[3-¹³C]标记乳酸的转化使用基于亲水相互作用液相色谱（HILIC）的液相色谱-质谱（LC-MS）测量。

2.权利要求1所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞，其来自于已建立的细胞系。

3.权利要求1至2中任一项所述的方法，其中将所述混合物中的乳酸浓度、或有氧糖酵解率、或经[3-¹³C]标记乳酸与未经标记乳酸之量的比值与具有对照或良性细胞或无细胞的相应混合物进行比较。

4.检测受试化合物改变有氧糖酵解的效力的非诊断目的的体外方法，其包括：

a）使受试化合物、包含哺乳动物细胞的样品和一定量的经[1-¹³C]标记葡萄糖相接触以提供混合物；以及

b）使用基于亲水相互作用液相色谱（HILIC）的液相色谱-质谱（LC-MS）相对于对照来测量所述混合物中所述经[1-¹³C]标记葡萄糖向经[3-¹³C]标记乳酸的转化或转化率或者经[3-¹³C]标记乳酸与未经标记乳酸之量的比值，从而确定受试化合物改变有氧糖酵解的效力。

5.权利要求4所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞，其来自于已建立的细胞系。

6.权利要求4或5所述的方法，其中所述受试化合物抑制所述经[1-¹³C]标记葡萄糖向所述经[3-¹³C]标记乳酸的转化或转化率，或者经[3-¹³C]标记乳酸与未经标记乳酸之量的比值。

7.检测基因突变对有氧糖酵解的作用的非诊断目的的体外方法，其包括：

a）使具有选定基因突变的哺乳动物细胞与一定量的经[1-¹³C]标记葡萄糖相接触；

b）使用基于亲水相互作用液相色谱（HILIC）的液相色谱-质谱（LC-MS）来测量所述细胞中所述经[1-¹³C]标记葡萄糖向经[3-¹³C]标记乳酸的转化；以及

c）将转化的乳酸的量与不具有所述选定突变的相应细胞中转化的乳酸的量进行比较，所述相应细胞与所述一定量的所述经[1-¹³C]标记葡萄糖相接触。