[发明专利]检测诺如病毒的方法

权利要求书

1.一种用于检测粪便样品中至少一种诺如病毒基因群的存在的方法，该方法包括：

使该粪便样品与以下各项接触：

i.扩增诺如病毒基因群I(GI)靶核酸的第一引物对，该诺如病毒基因群I(GI)靶核酸包含与SEQ ID NO:2或其互补体至少80％-95％一致的核苷酸；和

ii.扩增诺如病毒基因群II(GII)靶核酸的第二引物对，该诺如病毒基因群II(GII)靶核酸包含与SEQ ID NO:4或其互补体至少80％-95％一致的核苷酸；

以在如下条件下产生反应-样品混合物：其中如果该粪便样品中存在诺如病毒基因群I(GI)和诺如病毒基因群II(GII)靶核酸，那么在不从该粪便样品提取该靶核酸的情况下进行该诺如病毒基因群I(GI)和诺如病毒基因群II(GII)靶核酸的实时RT-PCR扩增。

2.权利要求1的方法，其还包括：

(a)使该反应-样品混合物经历实时RT-PCR条件，在该条件下该粪便样品中存在的每一靶核酸经扩增以产生荧光信号；

(b)检测步骤(a)中产生的每一经扩增靶核酸生成的荧光信号；并且

(c)通过评估每一靶核酸的荧光信号来检测该粪便样品中至少一种诺如病毒基因群的存在，其中检测到该诺如病毒基因群I(GI)靶核酸指示该粪便样品中存在诺如病毒基因群I(GI)；并且检测到该诺如病毒基因群II(GII)靶核酸指示该粪便样品中存在诺如病毒基因群II(GII)；其中在扩增前不对该粪便样品进行提取或纯化步骤。

3.权利要求1或权利要求2的方法，其中该第一引物对由包含5'dCGYTGGATGCGITTYCATGA 3'(SEQ ID NO:5)的第一正向引物和包含5'dTCCTTAGACGCCATCATCATTTAC 3'(SEQ ID NO:6)的第一反向引物组成。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中该第二引物对由包含5'dTGTTYAGGTGGATGAGRTTCTCIGA 3'(SEQ ID NO:9)的第二正向引物和包含5'dTCGACGCCATCTTCATTCACA 3'(SEQ ID NO:10)的第二反向引物组成。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中诺如病毒基因群I(GI)包含选自下组的一个或多个基因型，该组由以下各项组成：GI.1、GI.2、GI.3、GI.4、GI.5、GI.6、GI.7、GI.8、GI.9、GI.10和GI.14，并且诺如病毒基因群II(GII)包含选自下组的一个或多个基因型，该组由以下各项组成：GII.1、GII.2、GII.3、GII.4、GII.5、GII.6、GII.7、GII.8、GII.9、GII.10、GII.11、GII.12、GII.13、GII.14、GII.15、GII.16、GII.17、GII.18、GII.19、GII.20、GII.21、GII.22和GII.23。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其还包括使该粪便样品与第一核酸探针接触，该第一核酸探针能够与SEQ ID NO:2或其互补体的该诺如病毒基因群I(GI)靶核酸序列的区段特异性地杂交，其中该第一核酸探针经可检测方式标记并且包含5'dTGGACAGGAGAYCGCIATCTCYTGCCCGA 3'(SEQ ID NO:7)或其互补体。

7.权利要求6的方法，其中该第一核酸探针经CFR610荧光团以可检测方式标记。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其还包括使该粪便样品与第二核酸探针接触，该第二核酸探针能够与SEQ ID NO:2或其互补体的该诺如病毒基因群I(GI)靶核酸序列的区段特异性地杂交，其中该第二核酸探针经可检测方式标记并且包含5'dTGGACAGGAGATCGCAATCTACTGCCTGA 3'(SEQ ID NO:8)或其互补体。

9.权利要求8的方法，其中该第二核酸探针经CFR610荧光团以可检测方式标记。