[发明专利]用于表达乙肝病毒（HBV）抗原的慢病毒载体

说明书

本发明涉及核酸，包括慢病毒载体和慢病毒载体颗粒，其编码至少一种基因型A和/或C抗原的乙肝病毒(HBV)包膜表面，至少一种基因型A和/或C抗原的聚合酶，至少一种基因型A和/或C抗原的HBX蛋白，至少一种基因型A和/或C抗原的HBV共有核心，以及至少一种基因型A和/或C抗原的HBV共有核心MHCI和MHCII表位。本发明包括这些慢病毒载体和慢病毒载体颗粒，制备这些载体的方法，及其用途，包括医药用途。慢病毒载体和慢病毒载体颗粒用于向人给药以诱导针对HBV抗原的免疫应答。

技术领域

本发明属于重组疫苗技术的领域并涉及慢病毒载体的改进，其可用作治疗性和预防性疫苗。该病毒提供优于其他病毒的改善的免疫应答诱导。

背景技术

重组疫苗已随重组DNA技术的进步而发展，允许修饰病毒基因组以产生修饰的病毒。通过这种方式，已能够将遗传序列引入非致病性病毒，从而它们编码需要在感染或转导后于靶细胞内得以表达的免疫原性蛋白质，以在其宿主内发展特定免疫应答。

这类载体构成了疫苗技术的主要优势（Kutzler等，Nat Rev Genet, 9(10): 776-788, 2008）。具体而言，它们具有优于传统疫苗的优势：避免活（减毒的）病毒和消除灭活疫苗制造的相关风险。

在二十世纪八十年代早期由Mann等引入使用改性的逆转录病毒（逆转录病毒载体）的基因递送（Cell, 33(1):153-9, 1983）。最常用的致瘤性逆转录病毒基于莫洛尼（Moloney）鼠白血病病毒（MLV）。它们具有简单的基因组，从中产生多蛋白Gag、Pol和Env并且要求为反式以用于病毒复制（Breckpot等，2007, Gene Ther, 14(11):847-62；He等，2007, Expert Rev vaccines, 6(6):913-24）。一般需要的顺式序列是长末端重复序列(LTR)及其周边序列：用于整合的反向重复序列（IR或att位点）、包装序列Ψ、转运RNA结合位点（引物结合位点，PBS），和涉及逆转录的一些其它序列（正链起始必需的LTR内的重复R以及多嘌呤序列 (PPT)）。为了生成复制缺陷型逆转录病毒载体，通常使 gag、 pol和 env基因全部缺失，并且用表达盒替代。

源自慢病毒基因组的逆转录病毒载体（即，慢病毒载体）已涌现为用于基因治疗和免疫治疗目的的有希望的工具，因为它们显示优于其它病毒系统的若干优势。具体地，慢病毒本身没有毒性，并且与其它逆转录病毒不同，慢病毒能够转导非分裂细胞，尤其是树突状细胞（He等，2007, Expert Rev vaccines, 6(6):913-24），使得通过内源性途径呈递抗原。

慢病毒通过遗传组成相似性、复制的分子机制和与其宿主的生物相互作用连接。它们最常称为缓慢疾病综合征的试剂，该综合征在延长的亚临床感染之后开始并缓慢发展；因此，它们被称作慢摂病毒（Narayan等，1989, J Gen Virol, 70(7):1617-39）。其基本构成与所用逆转录病毒相同但由于附属基因（例如 vif、 vpr、 vpu、 nef、 tat和 rev）的存在而更为复杂，所述附属基因在慢病毒的体内复制中起关键作用。