[发明专利]用于以变体SH2结构域对蛋白质酪氨酸磷酸化进行概述的方法

权利要求书

1.SH2超结合体的用途，用于制备对测试样品的蛋白质激酶活性进行概述的方法的试剂，所述方法包括：

将所述测试样品与SH2超结合体饱和量的SH2超结合体接触，从而使包含于所述测试样品的含pTyr的肽与所述SH2超结合体结合；

将所述结合的含pTyr的肽从所述测试样品中分离；

通过质谱技术鉴定所述分离的含pTyr的肽，所述质谱技术包括多重反应监测、选择性反应监测、平行反应监测技术或串联质谱(MS/MS)技术；其中：

所述SH2超结合体是亲本SH2结构域的变体SH2结构域，且包含SEQ ID NO: 5、7、9、11、12、或13的序列，所述SH2超结合体在pTyr结合口袋中包括基于亲本SH2结构域的一个或多个氨基酸取代，其中取代导致SH2超结合体相较于亲本SH2结构域，对pTyr残基的亲和力相对于亲本SH2结构域增加至少10倍。

2.如权利要求1所述的用途，还包括通过质谱技术对所述分离的含pTyr的肽定量，所述质谱技术包括多重反应监测、选择性反应监测、平行反应监测技术或串联质谱(MS/MS)技术。

3.如权利要求1所述的用途，其中，所述SH2超结合体是哺乳动物SH2结构域的变体。

4.如权利要求1所述的用途，其中，所述SH2超结合体是Src、Grb2或Fyn SH2结构域的变体。

5.如权利要求1所述的用途，其中，所述SH2超结合体是三突变型SH2变体。

6.如权利要求1所述的用途，其中，所述SH2超结合体是四突变型SH2变体。

7.如权利要求1所述的用途，其中，所述SH2超结合体包含在融合蛋白内，所述融合蛋白包含一个或多个其他SH2超结合体。

8.如权利要求1所述的用途，其中，所述SH2超结合体固定于固体支持物。

9.如权利要求1所述的用途，其中，所述分离包括高效液相色谱技术或超高效色谱技术。

10.如权利要求1所述的用途，其中，所述样品获自对象。

11.如权利要求10所述的用途，其中，所述对象是人对象。

12.如权利要求10所述的用途，其中，所述样品是血清、血浆、尿、血液、组织或组织提取物。

13.如权利要求10所述的用途，其中，所述对象将被诊断患有癌症，或已知所述对象患有癌症。

14.如权利要求13所述的用途，其中，所述癌症是乳腺癌、肺癌、前列腺癌或白血病。

15.如权利要求1所述的用途，其中，所述样品已经暴露于酪氨酸激酶抑制剂、化疗剂、PD-1抑制剂或CTLA-4抑制剂。

16.如权利要求1所述的用途，其中，所述含pTyr的肽是特定蛋白质酪氨酸激酶底物的分离的含pTyr的肽。

17.如权利要求1所述的用途，其中，所述分离的含pTyr的肽包括特定蛋白质酪氨酸磷酸酶底物的含pTyr的肽。

18.如权利要求1所述的用途，其中，所述分离的含pTyr的肽包括来自蛋白质激酶的活化环或来自所述蛋白质激酶的活化环外部的含pTyr的肽。

19.如权利要求18所述的用途，其中，所述蛋白质激酶是酪氨酸激酶，丝氨酸/苏氨酸激酶，双特异性激酶，MAP激酶或脂质激酶。