[发明专利]分化细胞的制造方法和用于该制造方法的培养袋

说明书

本发明的课题在于，提供一种与现有的使用培养皿的方法相比能够以更大规模且在封闭系统中进行EB法的方法。该方法是利用类胚体(EB)法由多能干细胞制造分化细胞的方法，包括：(1)通过使用内侧表面具有全氟聚合物的培养袋培养多能干细胞而形成类胚体的工序；和(2)通过使上述工序(1)中得到的类胚体所含的多能干细胞诱导分化而得到分化细胞的工序。

技术领域

本发明涉及分化细胞的制造方法和用于该制造方法的培养袋。

背景技术

具有分化成各种细胞的能力的多能干细胞(pluripotent stem cell)在临床和药品开发研究等中的利用受到了期待。作为多能干细胞，进行了关于人工多能干细胞(induced Pluripotent Stem cell：iPS cell)和胚胎干细胞(Embryonic Stem cell：EScell)的利用的研究。

利用多能干细胞时，要求诱导分化成所希望的分化细胞的有效的方法。多能干细胞的诱导分化频繁使用所谓的类胚体(EB)法，该类胚体(EB)法通过利用低粘接性的培养皿(Schale)进行培养，使多能干细胞自然凝集而形成三维的块的类胚体(Embryoid Body：EB)。在类胚体的培养中，通过添加具有分化诱导作用的细胞因子、增殖因子或其他的化合物等，能够提高向目标细胞种的诱导效率。

在EB法中，目前作为非附着性的培养皿(Schale)，使用了涂敷有2－甲基丙烯酰氧基乙基磷酸胆碱等的具有磷脂类似结构的亲水性聚合物或水凝胶等的低粘接性的培养皿等(专利文献1)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2005/001019号

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的课题在于，提供一种与现有的使用培养皿的方法相比能够以更大规模且在封闭系统中进行EB法的方法。

用于解决课题的技术方案

本发明的发明人为了达成上述目的，反复精心研究后，首先想到了与现有的培养皿培养相比，能够悬浮培养更大量的多能干细胞的袋培养是有利的。但是，也判明了，使用与目前能够用于EB法的培养皿所使用的材料相同种类的材料，制造具有透气性的培养袋是困难的。本发明的发明人进一步反复试错后发现，通过使用内侧表面具备具有充分的透气性且超疏水性的全氟聚合物的培养袋，能够以与现有的使用培养皿的方法相同的效率、在封闭系统中并且以更大规模进行EB法，直至完成本发明。

本发明是基于这些知识而完成的发明，具有下述的实施方式。

项1.一种利用类胚体(EB)法由多能干细胞制造分化细胞的方法，其包括：

(1)通过使用内侧表面具有全氟聚合物的培养袋培养多能干细胞而形成类胚体的工序；和

(2)通过使上述工序(1)中得到的类胚体所含的多能干细胞诱导分化而得到分化细胞的工序。

项2.一种利用类胚体(EB)法将多能干细胞诱导分化的方法，其包括：

(1)通过使用内侧表面具有全氟聚合物的培养袋培养多能干细胞而形成类胚体的工序；和

(2)使上述工序(1)中得到的类胚体所含的多能干细胞诱导分化的工序。

项3.如项1或2所述的方法，其中，上述全氟聚合物为选自四氟乙烯/六氟丙烯共聚物、四氟乙烯/全氟烷基乙烯基醚共聚物和四氟乙烯/六氟丙烯/全氟烷基乙烯基醚共聚物中的至少一种的全氟聚合物。

项4.如项1～3中任一项所述的方法，其中，多能干细胞为人工多能干细胞(iPS细胞)或胚胎干细胞(ES细胞)。