[发明专利]多特异性抗体的纯化

权利要求书

1.一种从包含多特异性抗体和杂质的组合物中纯化多特异性抗体的方法，其中所述多特异性抗体包含多个臂，每个臂包含VH/VL单元，所述方法包括以下的顺序步骤：

a)使组合物进行捕获层析以产生捕获层析洗脱液；

b)使捕获层析洗脱液进行第一混合模式层析以产生第一混合模式洗脱液；和

c)使第一混合模式洗脱液进行第二混合模式层析以产生第二混合模式洗脱液；和

d)收集包含多特异性抗体的级分，

其中该方法减少了来自所述组合物的产物特异性杂质的量。

2.权利要求1的方法，其中在第一混合模式层析之前使捕获层析洗脱液进行离子交换或HIC层析。

3.一种从包含多特异性抗体和杂质的组合物中纯化多特异性抗体的方法，其中所述多特异性抗体包含多个臂，每个臂包含VH/VL单元，其中所述多特异性抗体的每个臂单独产生，所述方法包括顺序步骤：

a)使多特异性抗体的每个臂进行捕获层析以产生多特异性抗体的每个臂的捕获洗脱液，

b)在足以产生包含所述多特异性抗体的组合物的条件下，形成包含所述多特异性抗体的每个臂的捕获洗脱液的混合物，

c)使所述包含多特异性抗体的组合物进行第一混合模式层析以产生第一混合模式洗脱液，和

d)使第一混合模式洗脱液进行第二混合模式层析以产生第二混合模式洗脱液；和

e)收集包含所述多特异性抗体的级分，

其中该方法减少了来自所述组合物的产物特异性杂质的量。

4.权利要求3的方法，其中在第一混合模式层析之前，使所述包含多特异性抗体的组合物进行离子交换或HIC层析。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述捕获层析是亲和层析。

6.权利要求5的方法，其中所述亲和层析是蛋白L层析，蛋白A层析，蛋白G层析，蛋白A和蛋白G层析。

7.权利要求5或权利要求6的方法，其中所述亲和层析是蛋白A层析。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述捕获层析是以结合和洗脱模式进行。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中第一混合模式层析和第二混合模式层析是连续的。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中第一混合模式层析是混合模式阴离子交换层析。

11.权利要求1-10中任一项的方法，其中第二混合模式层析是混合模式阳离子交换层析。

12.权利要求1-9中任一项的方法，其中第一混合模式层析是混合模式阳离子交换层析。

13.权利要求1-10和12中任一项的方法，其中第二混合模式层析是混合模式阴离子交换层析。

14.权利要求1-13中任一项的方法，其中第一混合模式层析以结合和洗脱模式进行。

15.权利要求14的方法，其中所述洗脱是梯度洗脱。

16.权利要求1-13中任一项的方法，其中第一混合模式层析以流穿模式进行。

17.权利要求1-16中任一项的方法，其中第二混合模式层析以结合和洗脱模式进行。

18.权利要求17的方法，其中所述洗脱是梯度洗脱。

19.权利要求1-16中任一项的方法，其中第二混合模式层析以流穿模式进行。