[发明专利]改进的分化方法

权利要求书

1.用于分化祖细胞的方法，其中所述方法包括：

在分化培养基中培养所述细胞，所述分化培养基包含基础培养基，并且还包含一种或多种EGFR通路抑制剂、Notch抑制剂和一种或多种Wnt抑制剂。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种EGFR通路抑制剂选自：(1)EGFR抑制剂，(2)EGFR和ErbB2抑制剂，(3)RAS-RAF-MAPK通路抑制剂，(4)PI3K/AKT通路抑制剂，和(5)JAK/STAT通路抑制剂。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述一种或多种EGFR通路抑制剂包括EGFR抑制剂，如吉非替尼。

4.如权利要求2或3所述的方法，其中所述一种或多种EGFR通路抑制剂包括EGFR和ErbB-2抑制剂，如阿法替尼。

5.如权利要求2-4中任一项所述的方法，其中所述一种或多种EGFR通路抑制剂包括RAS-RAF-MAPK通路抑制剂，例如MEK抑制剂，如PD0325901，和/或ERK抑制剂，如SCH772984。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述Notch抑制剂是γ-分泌酶抑制剂，任选DAPT或二苯并氮杂(DBZ)或苯并二氮杂(BZ)或LY-411575。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述一种或多种Wnt抑制剂选自：(1)Wnt分泌的抑制剂，(2)Wnt或Rspondin与Wnt受体复合物之间相互作用的竞争性或非竞争性抑制剂，(3)促进所述Wnt受体复合物组分降解的抑制剂，(4)蓬乱蛋白家族蛋白抑制剂，(5)促进破坏复合物活性的激活剂，(6)破坏复合物解寡聚化的抑制剂，和/或(7)β-连环蛋白靶基因表达的抑制剂。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述一种或多种Wnt抑制剂包括Wnt分泌的抑制剂，例如选自IWP 2、LGK974和IWP 1的Porc抑制剂。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述分化培养基包含小于1mM的EGF。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述分化培养基还包含：

一种或多种选自以下的组分：p38抑制剂、TGF-β抑制剂、胃泌素、糖皮质激素、受体酪氨酸激酶配体、BMP通路激活剂、cAMP通路激活剂、Hedgehog激活剂、Hedgehog抑制剂、mTOR信号传导调节剂、B27和N2；或

一种或多种选自以下的组分：p38抑制剂、TGF-β抑制剂、胃泌素、糖皮质激素、受体酪氨酸激酶配体、BMP抑制剂、cAMP通路激活剂、Hedgehog激活剂、Hedgehog抑制剂、mTOR信号传导调节剂、B27和N2；或

BMP激活剂，如BMP7、BMP4或BMP2；或

BMP抑制剂，如头蛋白、硬化蛋白、脊索发生素、CTGF、卵泡抑素、gremlin、tsg、sog、LDN193189或dorsomorphin。

11.如权利要求1-10中任一项所述的分化培养基。

12.用于分化肠祖细胞以获得在肠内分泌细胞中富集的肠细胞群的方法，其中所述方法包括：

在权利要求11所述的分化培养基中培养所述肠祖细胞。

13.用于培养上皮干细胞的方法，其中所述方法包括：

在上皮干细胞的扩增培养基存在下培养所述上皮干细胞，以获得扩增的上皮干细胞；以及随后

在权利要求11所述的分化培养基中培养所述一种或多种扩增的细胞。

14.如权利要求1-10、12和13中任一项所述的方法，其中所述细胞与细胞外基质接触培养。