[发明专利]容器的制造方法及它的制造装置和细胞培养方法、细胞培养容器及它的制造方法、制造装置

说明书

本发明提供一种降低污染的风险，并且也较好地在同一容器内效率良好地对细胞进行培养、分化诱导等处理的容器。此外，提供一种能够确保广范围且平坦的培养面等的细胞培养容器。容器的制造方法包含：将袋状膜容器载置于形成有凹部的载置台，向所载置的袋状膜容器的内部导入流体，一面对载置台及按压构件中的至少一个加热，一面利用按压构件对载置于载置台的袋状膜容器加压。另一方面，细胞培养容器包含：第1容器壁，其具有透气性，为底面，由平面状的膜构成；及第2容器壁，其具有鼓出形状，该鼓出形状接触于该第1容器壁的周缘部并且相对于第1容器壁而突出；第1容器壁至少于与埠口接触的区域以外呈平面状。

技术领域

本发明涉及一种能够储存各种液体等的容器的制造方法及它的制造装置。此外，本发明涉及一种培养各种细胞的技术，更具体而言，涉及一种具有透气性且能够培养细胞的细胞培养容器、使用该细胞培养容器的细胞培养方法、及该细胞培养容器的制造方法。

背景技术

在由基因治疗或再生医疗所代表的现代医疗领域中，将作为目的的细胞(包含组织、微生物、病毒等)于人工环境下进行培养、分化诱导。而且，近年来，特别谋求于人工环境下效率良好地对大量的上述细胞进行培养、分化诱导。

在此处，当进行细胞的培养、分化诱导时，就对增殖的细胞进行必要的培养基成分的供给的观点而言，将培养基中的细胞密度维持于适当的范围变得重要。其原因在于：若随着细胞的增殖而培养基中的细胞密度变高，则会因培养基成分的枯竭或细胞自身的代谢产物的累积等而妨碍细胞的增殖。另一方面，也存在下述见解，即对于细胞的高效率增殖而言，形成某程度的细胞凝集块是重要的；培养基中的细胞密度过低，也无法使细胞有效率地增殖、分化诱导。

此种背景下，以前使用如下方法：反复进行继代培养，以恰当地维持培养基中的细胞密度。

作为此种继代培养的方法，有时将孔板或烧瓶等用作培养容器。

例如在专利文献1中，公开有如下技术：以成为适度的细胞密度的方式，使用孔板，将细胞与培养基一并加入至各个孔而开始培养(参照段落[0027]等)。在该专利文献1中提出：在孔内使细胞充分增殖后，转移至烧瓶，加入新培养基，在增殖至一定量时，转移至容量更大的烧瓶而进行相同的处理，以此大量培养细胞。

此外，在专利文献2中，公开有如下技术：在形成为长方体等多面体形状的烧瓶类型的培养容器的一侧，形成多个凹陷。在该专利文献2中，首先在上述多个凹陷形成细胞凝集块，继而将其移动至形成于容器内的对面的宽幅培养面，而成为更大的凝集块。

另一方面，作为以上述形态等而培养的培养细胞，根据该培养中的存在形态，可分类为黏着培养系细胞及悬浮培养系细胞。

黏着培养系细胞为附着于培养细胞的培养容器的例如底面等而增殖的培养细胞。在该黏着培养系细胞中，除了进行将既有的培养细胞转移至新培养容器而使其增殖的继代培养以外，也适当进行培养基更换。

在此处，关于上述细胞培养，之前提出有以下所示的培养容器。

作为例如在实验室中优选使用的容器，已知有具有无偏斜的平坦底面的培养皿(皮氏培养皿)或培养烧瓶。其中，培养皿也可使用盖将容器内密闭，对于排气型盖设置有肋，可选择排气/非排气位置。此外，与培养皿同样地，底面平坦的培养烧瓶也因培养面均一性、平滑性优异，因此也存在在显微镜观察时可获得良好视野的优点。

另一方面，针对使用培养皿或培养烧瓶的开放系细胞培养，还已知在栓紧的空间内进行细胞培养的封闭系细胞培养。在此种封闭系细胞培养中，对于确保透明性或透气性并且抑制污染风险的需求而言，优选使用由具有柔软性的树脂形成的细胞培养袋。

然而，在普通细胞培养袋中，对于注入培养液则成为培养面的底面会变得不平坦的问题，而提出有例如专利文献3般的细胞培养用托盘状容器。即，专利文献3所公开的细胞培养用托盘状容器有如下构成：第1容器壁具有透明且包含单一平面状的底面的凹部及形成于该凹部的周缘的凸缘状部，第2容器壁具有透气性，且具有能够变形的柔软性。