[发明专利]重组蛋白的生产方法

权利要求书

1.一种重组蛋白的生产方法，其为使用在诱导型启动子的调控下表达重组蛋白的重组细胞的该重组蛋白的生产方法，其中，

包括在使所述重组细胞增殖后的培养液的一部分中添加新鲜的培养基并连续地进行培养的步骤，

不重复使用诱导了所述重组蛋白的表达的重组细胞。

2.如权利要求1所述的重组蛋白的生产方法，其中，所述重组细胞的增殖和所述重组蛋白的表达的诱导在不同的培养槽中进行。

3.如权利要求1或2所述的重组蛋白的生产方法，其中，所述重组细胞的增殖通过流加培养进行。

4.一种重组蛋白的生产方法，其为使用在诱导型启动子的调控下表达重组蛋白的重组细胞的该重组蛋白的生产方法，其中，

包括重复进行下述(A)～(E)步骤：

(A)通过分批培养或流加培养使所述重组细胞在培养槽中增殖的步骤；

(B)在(A)步骤中的增殖后，将所述培养槽的培养液的一部分转移至接收用培养槽中的步骤；

(C)在(B)步骤中的转移后，在两个培养槽中的任意一个中添加新鲜的培养基，进入(A)步骤的步骤；

(D)在(C)步骤中未进入(A)步骤的另一个培养槽中诱导所述重组蛋白的表达，使所述重组蛋白蓄积的步骤；

(E)从培养液中分离和纯化(D)步骤中蓄积的所述重组蛋白的步骤。

5.如权利要求1～4中任一项所述的重组蛋白的生产方法，其中，在所述重组细胞的增殖达到对数生长期的中期时，开始所述重组蛋白的表达的诱导。

6.如权利要求1～5中任一项所述的重组蛋白的生产方法，其中，所述重组蛋白的表达的诱导通过在培养液中添加表达诱导剂、或者改变培养液的温度来进行。

7.如权利要求4所述的重组蛋白的生产方法，其中，以培养液总量为基准，在(B)步骤中转移至接收用培养槽中的培养液的量为80～99体积％。

8.如权利要求1～7中任一项所述的重组蛋白的生产方法，其中，所述重组细胞为编码所述重组蛋白的基因被整合至染色体中的细胞。

9.如权利要求1～8中任一项所述的重组蛋白的生产方法，其中，所述重组蛋白为结构蛋白。

10.如权利要求9所述的重组蛋白的生产方法，其中，所述结构蛋白为来源于选自由角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白、节肢弹性蛋白、蚕丝和蛛丝组成的组中的蛋白质的蛋白质。

11.如权利要求1～10中任一项所述的重组蛋白的生产方法，其中，所述诱导型启动子为选自T7启动子、tac启动子、trc启动子、lac启动子和lacUV5启动子中的IPTG诱导型启动子、或者选自PR启动子和PL启动子中的温度诱导型启动子。