[发明专利]用于提高核酸的扩增和检测/定量的效率的辅助寡核苷酸

权利要求书

1.一种用于检测和/或定量样品中的靶核酸的方法，所述方法包括：

(a) 使所述样品中的核酸与扩增试剂接触，所述扩增试剂包含：

至少一种包含DNA聚合酶活性的酶；

至少核苷三磷酸单体或其它核苷单体；

至少一种对所述靶核酸特异性的正向引物，或至少一种对所述靶核酸特异性的反向引物，或它们的组合，其用于产生至少一种扩增子；

至少一种非延伸辅助寡核苷酸，其中：(i)所述非延伸辅助寡核苷酸不会延伸，(ii)所述非延伸辅助寡核苷酸与所述引物中的至少一种对所述靶核酸的相同部分的一部分退火，和(iii)所述非延伸辅助寡核苷酸增强所述引物中的至少一种的活性；和

至少一种对所述扩增子特异性的可检测探针或至少一种DNA结合染料；

(b) 在足以使扩增反应发生的条件下将所述核酸与所述扩增试剂一起温育一段时间；和

(c) 用所述至少一种可检测探针或所述至少一种DNA结合染料检测所述扩增子。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸是微生物核酸。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述微生物核酸是细菌核酸或病毒核酸。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述病毒核酸是人乳头瘤病毒(HPV)、西尼罗河病毒(WNV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)的核酸。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述病毒核酸是HCV的核酸。

6.根据权利要求1-5中的任一项所述的方法，其中所述至少一种非延伸辅助寡核苷酸包含在所述至少一种非延伸辅助寡核苷酸的3’-端处的聚腺苷酸序列。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述聚腺苷酸序列具有在4-12个核苷酸之间的长度。

8.根据权利要求1-7中的任一项所述的方法，其中所述至少一种非延伸辅助寡核苷酸包含SEQ ID NO:5的序列或其互补序列。

9.根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其中所述至少一种正向引物包含SEQ IDNO:1的序列或其互补序列。

10.根据权利要求1-9中的任一项所述的方法，其中所述至少一种反向引物包含选自SEQ ID NO:2和3的序列或其互补序列。

11.根据权利要求1-10中的任一项所述的方法，其中所述至少一种探针包含SEQ IDNO:4的序列或其互补序列。

12.根据权利要求1-11中的任一项所述的方法，其中所述至少一种正向引物包含SEQID NO:1的序列或其互补序列；所述至少一种反向引物包含选自SEQ ID NO:2和3的序列或其互补序列；和所述至少一种探针包含SEQ ID NO:4的序列或其互补序列。