[发明专利]编码促凋亡蛋白的核酸的膳食受控表达

说明书

本发明涉及用于在个体中编码促凋亡蛋白的核酸的受控表达的核酸，其包括：‑调节性多核苷酸，所述调节性多核苷酸包含最小启动子和至少一种AARE(氨基酸应答元件)核酸，在摄入缺乏至少一种必需氨基酸的膳食后所述调节性多核苷酸在个体中被激活；和‑编码促凋亡蛋白的核酸，所述编码促凋亡蛋白的核酸被置于所述调节性多核苷酸的控制下。

技术领域

本发明涉及用于在个体中编码促凋亡蛋白的核酸的受控表达的核酸。

特别地，可以在摄入缺乏至少一种必需氨基酸的膳食后控制核酸的表达。

背景技术

最近，基因转移载体的技术改进和适当的基因递送系统的发展已使得基因疗法取得了实质性的临床成功。然而，在基因疗法成为各种疾病广泛接受的治疗之前，必须克服几个障碍。除了关于可用载体系统的安全性问题(例如遗传毒性、免疫应答)之外，主要限制是当前不能以可靠、高度特异性、简单且安全的方式外源地调节转基因的表达。一种策略将是以剂量依赖性方式调节基因表达，例如通过口服可用的耐受良好的诱导物。此外，基因表达的诱导和抑制都应该是可逆的。

科学界同意这样一个事实，即如果有可能在不良事件的情况下迅速消除输注的细胞，则细胞疗法可以在癌症治疗和再生医学中发挥作用。更具体地，基于过继性嵌合抗原受体(CAR)T细胞的治疗迫切需要完全安全的分子开关，以实现其为多种类型的癌症提供治愈的巨大希望。这种开关对于确保基于干细胞(特别是造血干细胞)和基于iPS细胞的疗法的潜力并且促进再生医学领域也是非常宝贵的。

过继性T细胞疗法最初涉及肿瘤特异性T细胞的分离和离体扩增，以获得比单独接种疫苗所获得的更多数量的T细胞。然后将肿瘤特异性T细胞输注到患有癌症的患者中，试图经由T细胞识别肿瘤特异性抗原和癌细胞破坏使其免疫系统能够压倒剩余的肿瘤。换句话说，此类疗法涉及操纵患者自身的免疫细胞以识别和攻击他们的肿瘤。

有几种形式的过继性T细胞疗法用于癌症治疗：培养和扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)，分离和扩增一种特定的T细胞克隆，以及使用经过工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞以有效识别肿瘤抗原并破坏肿瘤细胞。CAR T细胞在临床试验中表现最有希望，目前仅在美国注册超过50项CAR临床试验(clinicaltrials.gov)。值得注意的是，嵌合抗原受体(CAR)-重定向的T细胞在难治性白血病患者中产生了长期持久的缓解和显著的客观应答率。

迄今为止，CAR技术通过从每名患者自己的T细胞定制制造治疗产品来施用。然而，这种患者特异性自体范例是CAR技术大规模部署的重要限制因素。目前正在开发用于在同种异体移植的背景下从不相关的第三方供体T细胞产生“现成的”CAR T细胞的平台。

尽管CAR T细胞在临床上已显示出很大的初步前景，但这些发展伴随着一些严重且甚至致命的副作用(Gargett和Brown,Front Pharmacol.,2014年10月28日；5:235)。

已经观察到，移植后复发患者的供体T细胞输注可以通过移植物抗白血病效应导致疾病缓解，但这通常与由于针对非造血组织的同种免疫导致的GVHD(移植物抗宿主病)的发展有关(Kolb,Blood,2008年12月1日；112(12):4371-83)。

由于可以预期靶向分化抗原的T细胞也识别表达相同抗原的非恶性细胞，因此可能发生中靶但脱肿瘤的不良反应，导致不良事件。例如，用靶向黑素细胞分化抗原(例如MART-1和gp100)的T细胞治疗的黑素瘤患者经常发生白癜风和葡萄膜炎(Teulings等,2014；Pigment Cell Melanoma Res.2014年11月；27(6):1086-96.)。

中靶但脱肿瘤毒性可以立即危及生命。具有肺和肝转移肿瘤的结肠直肠癌患者在HER2-特异性CAR T细胞输注的15分钟内发生呼吸窘迫，并且随后在5天后死于多器官衰竭。