[发明专利]用于产生具有体内血管形成能力的中胚层和/或内皮集落形成细胞样细胞的方法

说明书

本公开内容通常涉及可用于细胞和组织生物学和治疗学的方法和组合物。特别地，提供了一种用于将多能干细胞分化成KDR⁺NCAM⁺APLNR⁺中胚层细胞和/或SSEA5^‑KDR⁺NCAM⁺APLNR⁺中胚层细胞的体外方法。公开的中胚层细胞可以用于在体内产生血管和/或在体外进一步分化成内皮集落形成细胞样细胞(ECFC样细胞)。提供了纯化的KDR⁺NCAM⁺APLNR⁺中胚层细胞和ECFC样细胞的人细胞群体。提供了用于使用本公开内容的细胞群体的测试剂筛选和治疗方法。

先前申请的交叉引用

本申请要求于2016年8月10日提交的美国临时专利申请序列号62/372,907的权益，其通过引用并入本文，如同以其整体阐述一样。

公开内容的领域

本公开内容涉及细胞和组织生物学领域。更具体地，本公开内容涉及多能干细胞向可以在体内形成血管的中胚层细胞和/或内皮集落形成细胞样细胞(ECFC样细胞)的谱系特异性分化。

公开内容的背景

内皮集落形成细胞(ECFC)是罕见的循环内皮细胞，在脐带血中特别丰富，具有克隆增殖潜力和固有的体内血管形成能力(Yoder,M.C.等人.Blood 109,1801-1809(2007)；Ingram,D.A.等人.Blood 105,2783-2786(2005)；Ingram,D.A.等人.Blood 104,2752-2760(2004)；Critser,P.J.等人.Microvasc Res 80,23-30(2010)；Au,P.等人.Blood 111,1302-1305(2008)；Melero-Martin,J.M.等人.Circ Res 103,194-202(2008))。不理解的是，脐带血或供体骨髓中什么类型的细胞会产生ECFC。当培养的原代ECFC被静脉内注射到啮齿动物血管损伤模型中时，它们被募集到血管损伤或组织缺血的部位，以协调血管生成反应的启动(Moubarik,C.等人.Stem Cell Rev 7,208-220(2011)；Schwarz,T.M.等人.Arterioscler Thromb Vasc Biol 32,e13-21(2012)；Saif,J.等人.ArteriosclerThromb Vasc Biol 30,1897-1904(2010))。已经报道了，在心肌梗死(Dubois,C.等人.J AmColl Cardiol 55,2232-2243(2010)；Schuh,A.等人.Basic Res Cardiol 103,69-77(2008))、卒中(Moubarik,C.等人.2011)、缺血性视网膜病(Stitt,A.W.等人.Prog RetinEye Res 30,149-166(2011)；Medina,R.J.等人.Invest Ophthalmol Vis Sci 51,5906-5913(2010))、缺血性肢体损伤(Schwartz等人.2012；Saif等人.2010；Bouvard,C.等人.Arterioscler Thromb Vasc Biol 30,1569-1575(2010)；Lee,J.H.等人.ArteriosclerThromb Vasc Biol(2013))、以及移植和再内皮化剥除的血管区段或植入的移植物(Stroncek,J.D.等人.Acta Biomater 8,201-208(2012))后，人ECFC增强血管修复并改进血液流动。在患有外周动脉疾病(PAD)和严重肢体缺血(CLI)的受试者中，循环或驻留的ECFC可以变得易于复制衰老(即ECFC可以缺少增殖潜力)，因而使它们对自体血管修复无能为力。至少由于这些原因，合意的是找到可以用于血管修复的ECFC或其他细胞类型的替代来源。