[发明专利]VI型CRISPR直向同源物和系统

权利要求书

1.一种修饰感兴趣的哺乳动物靶基因座的方法，该方法包括向所述基因座递送非天然存在的或工程化的组合物，该组合物包含与一个或多个定位信号融合的C2c2效应蛋白和一种或多种核酸组分，其中至少该一种或多种核酸组分被工程化，该一种或多种核酸组分将该复合物引导至该感兴趣的靶标，并且该效应蛋白与该一种或多种核酸组分形成复合物，并且该复合物与该感兴趣的靶基因座结合。

2.一种非天然存在的或工程化的组合物，该组合物包含与一个或多个定位信号融合的C2c2效应蛋白和一种或多种核酸组分，其中至少该一种或多种核酸组分被工程化用于在修饰感兴趣的哺乳动物靶基因座中使用，该一种或多种核酸组分将该复合物引导至该感兴趣的靶标，并且该效应蛋白与该一种或多种核酸组分形成复合物，并且该复合物与该感兴趣的靶基因座结合。

3.一种非天然存在的或工程化的组合物的用途，该组合物包含与一个或多个定位信号融合的C2c2效应蛋白和一种或多种核酸组分，其中至少该一种或多种核酸组分被工程化用于修饰感兴趣的哺乳动物靶基因座，该一种或多种核酸组分将该复合物引导至该感兴趣的靶标，并且该效应蛋白与该一种或多种核酸组分形成复合物，并且该复合物与该感兴趣的靶基因座结合。

4.如权利要求1-3或58-59中任一项所述的方法、组合物或用途，其中该感兴趣的靶基因座包含RNA。

5.如权利要求1-4或58-59中任一项所述的方法、组合物或用途，其中所述定位信号是核定位信号(NLS)或核输出信号(NES)，优选NES。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中该感兴趣的靶基因座的修饰包括链断裂。

7.如权利要求1-6或58-59中任一项所述的方法、组合物或用途，其中该C2c2效应蛋白针对在哺乳动物细胞中表达进行密码子优化。

8.如权利要求1-7或58-59中任一项所述的方法、组合物或用途，其中该C2c2效应蛋白与一个或多个功能结构域缔合；并且任选地，该效应蛋白含有任选地在HEPN结构域内的一个或多个突变，如R597A、H602A、R1278A和/或H1283A，由此该复合物可以递送表观遗传修饰因子或者转录或翻译活化或阻遏信号。

9.如权利要求8所述的方法、组合物或用途，其中该功能结构域修饰该靶基因座的转录或翻译。

10.如权利要求1-9或58-59中任一项所述的方法、组合物或用途，其中该感兴趣的靶基因座被包含在细胞内的核酸分子中。

11.如权利要求1-10或58-59中任一项所述的方法、组合物或用途，其中所述修饰是在体内或离体进行的。

12.如前述权利要求中任一项所述的方法、组合物或用途，其中当与该效应蛋白复合时，该一种或多种核酸组分能够实现该复合物与该感兴趣的靶基因座的靶序列的序列特异性结合。

13.如前述权利要求中任一项所述的方法、组合物或用途，其中该一种或多种核酸组分包含双同向重复序列。

14.如前述权利要求中任一项所述的方法、组合物或用途，其中该效应蛋白和一种或多种核酸组分是经由编码这些多肽和/或该一种或多种核酸组分的一种或多种多核苷酸分子提供的，并且其中该一种或多种多核苷酸分子可操作地配置成表达这些多肽和/或该一种或多种核酸组分。

15.如权利要求14所述的方法、组合物或用途，其中该一种或多种多核苷酸分子包含一种或多种调节元件，该一种或多种调节元件可操作地配置成表达这些多肽和/或该一种或多种核酸组分，任选地其中该一种或多种调节元件包括一个或多个启动子或者一个或多个诱导型启动子。