[发明专利]生产巨核细胞组合物和用于治疗血小板减少的疗法

权利要求书

1.创建巨核细胞产物的方法，其包括：

(i)在包含至少一种细胞因子的第一培养基中培养包含造血干细胞(HSC)的细胞群体，并将所述细胞群体第一次扩充约24小时至约96小时；

(ii)在包含至少一种细胞因子的第二培养基上培养所述细胞群体，并将所述细胞群体第二次扩充约24小时至约96小时，其中在第二培养基上培养所述细胞群体诱导巨核细胞(MK)产物形成偏倚；并且

(iii)收集所得的巨核细胞产物。

2.权利要求1的方法，其进一步包括在(iii)收集步骤前进行的下述步骤：在包含至少一种细胞因子的第三培养基上培养所述细胞群体，并将所述细胞群体第三次扩充约72小时至约120小时。

3.权利要求1-2中任一项的方法，其中所述(ii)培养步骤还包括对所述培养基添加染色质修饰剂(chromatin-modifying agent)。

4.权利要求3的方法，其中所述染色质修饰剂包括丙戊酸(VPA)。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述包含造血干细胞的细胞群体源自脐带血(CB)、骨髓(BM)、外周血(PB)或其组合。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述第一培养基包含干细胞因子(SCF)、白细胞介素-3(IL-3)、Fms样酪氨酸激酶3(FLT-3)、血小板生成素(thrombopoeitin)(TPO)及其组合中的至少一种。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述第二培养基包含干细胞因子(SCF)、血小板生成素(TPO)及其组合中的至少一种。

8.权利要求2-7中任一项的方法，其中所述第三培养基包含血小板生成素。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述第一培养基、所述第二培养基和所述第三培养基中的至少一种是无血清(SF)培养物。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中步骤(ii)还包括添加至少一种另外的细胞因子。

11.权利要求10的方法，其中所述至少一种另外的细胞因子包括白细胞介素-6(IL-6)。

12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述巨核细胞产物包含巨核细胞祖细胞、未成熟巨核细胞、成熟巨核细胞及其组合中的至少一种。

13.巨核细胞产物，其包含巨核细胞祖细胞、未成熟巨核细胞和成熟巨核细胞，其中所述组合物是冷冻保存的。

14.治疗有此需要的受试者中的血小板减少(thrombocytopenia)的方法，其包括对所述受试者施用通过权利要求1-12中任一项离体产生的巨核细胞产物。

15.权利要求14的方法，其中所述巨核细胞产物是巨核细胞祖细胞、未成熟巨核细胞和成熟巨核细胞的异质群体。

16.权利要求14-15中任一项的方法，其中在对所述受试者施用前将所述巨核细胞产物冷冻保存。

17.巨核细胞产物，其包含巨核细胞祖细胞、未成熟巨核细胞和成熟巨核细胞以及药学上可接受的载体或防腐剂。

18.治疗有此需要的受试者中的血小板减少的方法，其包括对所述受试者施用治疗有效量的权利要求17的组合物。

19.权利要求17的组合物，其用于治疗有此需要的受试者中的血小板减少。

20.权利要求17的组合物在制备用于治疗有此需要的受试者的血小板减少的药物中的用途。