[发明专利]利用糖苷内切酶突变体重塑糖蛋白及其使用方法

权利要求书

1.一种糖苷内切酶S2(endoglycosidase,EndoS2)突变体，其于一野生型糖苷内切酶S2(SEQ ID NO:1)序列中包含一或多个突变点，其中该一或多个突变点是位于残基133-143、残基177-182、残基184-189、残基221-231及/或残基227-237内的一肽区域内，其中该糖苷内切酶S2突变体的水解活性低于该野生型糖苷内切酶S2的水解活性，且该糖苷内切酶S2突变体的转糖苷化活性高于该野生型糖苷内切酶S2的转糖苷化活性。

2.如权利要求1所述的糖苷内切酶S2突变体，其特征在于，该一或多个突变点是位于残基T138、D182、D226、T227及/或T228。

3.如权利要求1所述的糖苷内切酶S2突变体，其特征在于，该一或多个突变点是选自由T138D、T138E、T138F、T138H、T138K、T138L、T138M、T138N、T138Q、T138R、T138V、T138W、D182Q、D226Q、T227Q及T228Q所组成的群组。

4.如权利要求1所述的糖苷内切酶S2突变体，其特征在于，该糖苷内切酶S2突变体包含SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的序列。

5.一种使用如权利要求1-4所述的任一种糖苷内切酶S2突变体来制备一经糖工程改造的糖蛋白的方法，包含将一活化寡糖耦合至一糖蛋白受体。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，该活化寡糖是一聚糖恶唑啉。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，该聚糖恶唑啉包含一具有以下化学式的N-聚糖：

其中，R¹是透过β-1,4键合的–H或N-乙酰葡萄糖胺；以及

R²及R³可以相同或不同，且是独立选自由：

所组成的群组。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，该糖蛋白受体含有一GlcNAc单糖。

9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，该糖蛋白受体是一非海藻糖化GlcNAc-受体。

10.如权利要求5所述的方法，其特征在于，该糖蛋白受体是一糖肽、一糖蛋白、一抗体或其片段。

11.如权利要求5所述的方法，其特征在于，该糖蛋白受体为一核心海藻糖化或非海藻糖化的GlcNAc-IgG受体或其片段。