[发明专利]包含BCMA特异性III型纤连蛋白结构域的嵌合抗原受体及其用途

说明书

描述了BCMA特异性III型纤连蛋白(FN3)结构域、包含FN3结构域的靶向BCMA的嵌合抗原受体(CAR)，以及表达CAR的工程化靶向BCMA的免疫细胞。还描述了编码FN3结构域和CAR的核酸和表达载体、包含载体的重组细胞，以及包含工程化免疫细胞的组合物。还描述了制备FN3结构域、CAR、以及工程化免疫细胞的方法，用工程化免疫细胞治疗包括癌症在内的疾病的方法。

序列表

本申请包含已经以ASCII格式电子递交的序列表，所述序列表据此全文以引用方式并入。所述ASCII副本创建于2017年8月31日，命名为JBI5097WOPCT_SL.txt，并且大小为138,671字节。

技术领域

本发明涉及BCMA特异性III型纤连蛋白(FN3)结构域、包含FN3结构域的靶向BCMA的嵌合抗原受体(CAR)，以及表达CAR的工程化靶向BCMA的免疫细胞。还提供了编码FN3结构域和CAR的核酸和表达载体、包含载体的重组细胞，以及包含表达靶向BCMA的CAR的工程化免疫细胞的组合物。还提供了制备FN3结构域、CAR、以及工程化免疫细胞的方法，使用工程化免疫细胞治疗包括癌症在内的病症的方法。

背景技术

使T细胞遗传工程化成用于以靶特异性的方式特异性地结合和杀伤肿瘤细胞的结果是建立了用于癌症患者的新治疗选项——称作工程化T细胞疗法。这种靶向通常通过对具有编码嵌合抗原受体(CAR)的重组DNA分子的来源于患者的T细胞进行遗传学操作而产生。CAR是包含连接于肽接头的胞外靶向结构域、跨膜(TM)结构域、以及一个或多个胞内信号结构域的合成受体。传统地，胞外结构域由对给定的肿瘤相关抗原(TAA)或细胞表面靶标有特异性的抗体的单链Fv片段(scFv)组成。胞外scFv结构域赋予CAR肿瘤特异性，而信号结构域在TAA/靶标结合时激活T细胞。将这些工程化T细胞(CAR-T细胞)再灌注到癌症患者体内，其中它们特异性地结合并杀伤表达CAR的TAA靶的细胞(Maus等人，Blood.2014年4月24日；123(17):2625-35；Curran和Brentjens,J Clin Oncol.2015年5月20日；33(15):1703-6)。

免疫球蛋白(Ig)折叠存在于抗体以及数千种非抗体蛋白质的可变区。已证实，一种这样的Ig蛋白，即人纤连蛋白的第10个III型纤连蛋白(FN3)重复序列，能容忍表面所暴露的环中的许多突变而保持总体的Ig折叠结构。氨基酸变体库已构建进这些环以及所选的与多个不同靶点结合的特定结合蛋白中。已发现此类工程化的FN3结构域以较高的亲和力与靶点结合，同时保持重要的生物物理特性。参见例如US2010/0216708及其中的参考文献。

报道CAR-T疗法在血液恶性肿瘤中的有前景用途的许多临床研究通过靶向CD19或CD20而致力于B细胞恶性肿瘤。虽然CAR T细胞疗法作为高效疗法出现，仍然需要改善该疗法的某些方面，诸如，例如CAR信号转导的优化、最佳靶抗原的鉴定、细胞制备方法的优化、CAR T细胞疗法安全性的提高、改善CAR T细胞的治疗潜力的组合策略的优化等(Dai等人，JNatl Cancer Inst.2016年1月27日；108(7))。

多发性骨髓瘤(MM)是一种以克隆浆细胞的积聚为特征的癌症。MM是第二常见的血液恶性肿瘤，并且其占全部癌症死亡数多至2％。MM是异质性疾病，并且以宽泛的侵袭性和治疗抗性范围为特征。一些患者在诊断后存活十年或更久，而其它患者则遭受迅速的治疗抗性进展并在2年内死亡。尽管新治疗剂的开发取得进展，目前MM仍是无法治愈的。虽然当前疗法通常导致MM缓解，但疾病最终在几乎所有患者中复发并最终致死(Naymagon andAbdul-Hay,J Hematol Oncol.2016年6月30日；9(1):52)。此外，常规治疗方法，包括化学疗法和放射疗法由于毒副作用而具有有限的实用性。因此，本领域中仍然需要用于治疗MM的更有效治疗剂。