[发明专利]提取核酸的方法和该方法中使用的试剂盒

说明书

本发明公开一种从生物体试样中提取核酸的方法。该方法具备：(i)将生物体试样、阴离子型表面活性剂和离液化合物混合而得到溶解液的步骤；(ii)将溶解液、沸点超过75℃的烷醇、离液化合物和二氧化硅粒子混合而使核酸吸附在二氧化硅粒子上的步骤；(iii)利用清洗液对吸附有核酸的二氧化硅粒子进行清洗的步骤；以及(iv)利用洗脱液将吸附在二氧化硅粒子上的核酸洗脱的步骤，至少步骤(i)和(ii)在超过75℃的温度下进行。

技术领域

本发明涉及提取核酸的方法和该方法中使用的试剂盒。

背景技术

作为从生物体试样中提取核酸的方法之一，有BOOM法(例如参考专利文献1)。在该方法中，在离液化合物(chaotropic compound)的存在下使核酸吸附在二氧化硅粒子上，将核酸从生物体试样中分离，该离液化合物是从核酸等生物体高分子中夺去水合水而使该生物体分子的高级结构变得不稳定的物质。

作为利用BOOM法的方法，可以列举例如下述方法，该方法具备将生物体试样溶解的步骤、以及在离液化合物和/或烷醇的存在下将二氧化硅等和核酸固定化的步骤，其中，在36～75℃的温度范围内实施该核酸的固定化(例如参考专利文献2)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平2-289596号公报

专利文献2：日本特表2008-529509号公报

发明内容

发明所要解决的问题

为了提取核酸，需要进行破坏细胞的膜结构、使内容物释放到细胞外的溶解步骤。作为溶解方法之一，在市售的核酸提取试剂盒中广泛采用利用蛋白分解酶的酶溶解法。另外，在从微生物中的革兰氏阳性菌或真菌等具有特殊细胞壁的细胞中提取核酸的情况下，需要另外利用溶菌酶、酵母裂解酶等细胞壁分解酶进行预处理。因此，根据生物材料的种类，所对应的试剂盒或操作规程通常有所不同。

另外，对于大多数采用酶溶解法的试剂盒而言，相对于核酸提取的全部步骤时间，溶解步骤占据了大部分的时间。另外，多数情况下需要进一步进行离心分离步骤。因此，不适合于要求快速性的应用。

本发明是鉴于这样的实际情况而完成的，因此，本发明的目的在于提供能够缩短从生物体试样中提取核酸所要的时间的、提取核酸的方法和该方法中使用的试剂盒。

用于解决问题的方法

本发明提供一种从生物体试样中提取核酸的方法，其具备：(i)将生物体试样、阴离子型表面活性剂和离液化合物混合而得到溶解液的步骤；(ii)将溶解液、沸点超过75℃的烷醇、离液化合物和二氧化硅粒子混合而使核酸吸附在二氧化硅粒子上的步骤；(iii)利用清洗液对吸附有核酸的二氧化硅粒子进行清洗的步骤；以及(iv)利用洗脱液将吸附在二氧化硅粒子上的核酸洗脱的步骤，至少步骤(i)和(ii)在超过75℃的温度下进行。

上述方法中，优选步骤(iv)在超过75℃的温度下进行。

沸点超过75℃的烷醇可以为1-丙醇。

阴离子型表面活性剂优选为十二烷基硫酸锂。

离液化合物可以为胍盐。

另外，本发明提供一种核酸提取试剂盒，其包含：含有阴离子型表面活性剂的第一溶解用溶液；含有离液化合物的第二溶解用溶液；以及含有沸点超过75℃的烷醇、离液化合物和二氧化硅粒子的吸附液。

试剂盒中，沸点超过75℃的烷醇可以为1-丙醇。

试剂盒中，阴离子型表面活性剂优选为十二烷基硫酸锂。

试剂盒中，离液化合物可以为胍盐。

发明效果