[发明专利]细胞外囊泡（EV）的组合物及其医学用途

权利要求书

1.制备细胞外囊泡(EV)的药物制剂的方法，其包括以下步骤：

从体液的多种制备物中或从细胞培养物的条件培养基中分离EV；

以预定的EV浓度从分离的EV制备一个或更多个样品；

在效力测试中测试每个EV样品的活性；

选择超过预定活性的样品以用于进一步加工成药物制剂；以及任选地合并两个或更多个活性EV样品。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述效力测试如权利要求2至8中任一项所限定。

3.权利要求1或2所述的方法，其中所述EV来自人细胞。

4.从血液成分(EV)中分离的细胞外囊泡(EV)的组合物，其用于通过促血管生成治疗来治疗缺血性疾病或缺血性损伤或者用于伤口愈合。

5.细胞外囊泡(EV)的组合物，其用于治疗受促血管生成治疗积极影响的疾病或损伤或者用于伤口愈合，其中当在效力测试中测量时，所述组合物的％活性为至少50％，所述效力测试包括以下步骤：

-通过BrdU细胞增殖测定来测量所述组合物的活性；

-通过BrdU细胞增殖测定来测量阴性对照的活性；

-通过BrdU细胞增殖测定来测量阳性对照的活性；

-通过应用以下公式计算在所述BrdU细胞增殖测定中所述组合物的％活性：

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述阳性对照是基于HMEC细胞的BrdU细胞增殖测定，其使用补充有10％血清的内皮基础培养基并且涉及以10000个EV/细胞刺激所述HMEC细胞，并且其中所述阴性对照是使用相同细胞和培养基但没有血清补充的BrdU细胞增殖测定。

7.根据权利要求5或6所述的组合物，其中所述效力测试根据说明书的实施例1.4.1来进行。

8.细胞外囊泡(EV)的组合物，其用于治疗受促血管生成治疗积极影响的疾病或损伤或者用于伤口愈合，其中当在效力测试中测量时，所述组合物的％活性为至少50％，所述效力测试包括以下步骤：

-通过管生成测定来测量所述组合物的活性；

-通过管生成测定来测量阴性对照的活性；

-通过管生成测定来测量阳性对照的活性；

-通过应用以下公式计算在所述管生成测定中所述组合物的％活性：

9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述阳性对照是基于HUVEC细胞的体外管生成测定，其使用补充有10ng/ml VEGF的内皮基础培养基并且涉及用以50000个EV/细胞刺激所述细胞，并且其中所述阴性对照是使用相同细胞和培养基但没有VEGF补充的体外管生成测定。

10.根据权利要求8或9所述的组合物，其中所述效力测试根据说明书的实施例1.4.2来进行。

11.根据权利要求5至10中任一项所述的组合物，其中当在包括权利要求2至4中任一项所述BrdU细胞增殖测定和根据权利要求5至7中任一项所述管生成体外测定二者的效力测试中测量时，所述组合物的％活性为至少50％。

12.根据权利要求5至11中任一项所述的组合物，其中所述EV是从血液成分中分离的细胞外囊泡(sEV)。

13.根据权利要求5至12中任一项所述的组合物，其由健康供体的血液捐献物制备。

14.根据权利要求5至11中任一项所述的组合物，其中所述EV是从细胞培养物的条件培养基中分离的细胞外囊泡。

15.根据权利要求4至14中任一项所述的组合物，其为药物制剂。