[发明专利]肌肉干细胞的体外制备

权利要求书

1.一种制备肌肉干细胞群的体外方法，所述方法包括在3D细胞培养中共培养多能干细胞、胚胎成纤维细胞和内皮细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括以下步骤：

(a)使所述多能干细胞、胚胎成纤维细胞和内皮细胞混合；以及

(b)建立至少一个包含多能干细胞、胚胎成纤维细胞和内皮细胞的3D球体。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述肌肉干细胞为骨骼肌干细胞。

4.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述多能干细胞为诱导多能干细胞或胚胎干细胞，优选诱导多能干细胞。

5.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述多能干细胞为人类多能干细胞。

6.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述胚胎成纤维细胞为哺乳动物胚胎成纤维细胞，优选小鼠或人类胚胎成纤维细胞。

7.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述内皮细胞为哺乳动物内皮细胞，优选小鼠或人类内皮细胞。

8.根据任一前述权利要求所述的方法，其中：

(a)所述多能干细胞和胚胎成纤维细胞的比例为约0.3-4:1，优选约1.5-2.5:1；

(b)所述多能干细胞和内皮细胞的比例为约0.3-4:1，优选约1.5-2.5:1；并且/或者

(c)所述胚胎成纤维细胞和内皮细胞的比例为约1-2:1。

9.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述多能干细胞、胚胎成纤维细胞和内皮细胞的比例为约0.3-4:1:1，优选约1.5-2.5:1:1。

10.根据任一前述权利要求所述的方法，其中将所述多能干细胞、胚胎成纤维细胞和内皮细胞培养约3至30天，优选约5至20天。

11.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述培养物还包含除胚胎成纤维细胞之外的成纤维细胞、平滑肌细胞和/或成肌细胞。

12.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述肌肉干细胞为Pax7⁺和/或NCAM⁺和/或CD82⁺。

13.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述肌肉干细胞对于定向因子为阴性的，优选其中所述肌肉干细胞为Myf5-和/或肌细胞生成素-和/或MyoD-。

14.一种分离的肌肉干细胞，所述分离的肌肉干细胞能够使用根据任一前述权利要求所述的方法获得。

15.根据权利要求14所述的肌肉干细胞在疗法中的用途，优选在治疗或预防肌肉疾病、优选肌肉萎缩、肌病或肌营养不良中的用途。

16.一种筛选能够增加肌肉干细胞自我更新、增殖或分化的药剂的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供能够使用根据权利要求1至11中任一项所述的方法获得的肌肉干细胞群；

(b)使步骤(a)的所述肌肉干细胞群接触候选药剂；以及

(c)确定所述候选药剂是否增加肌肉干细胞自我更新、增殖或分化。