[发明专利]用于改善的蛋白质的分泌的信号多肽

说明书

本发明涉及用于改善异源多肽排泄产生的信号多肽、包含信号多肽的蛋白质、编码信号多肽的核酸及其使用方法。

序列表

本申请含有已以ASCII格式以电子方式提交且特此以引用的方式整体并入的序列表。所述ASCII副本创建于2017年10月19日，名称为NSP4-100-WO-PCT-SequenceListing并且大小为17,021字节。

技术领域

本发明涉及用于改善异源多肽排泄产生的信号多肽、包含信号多肽的蛋白质、编码信号多肽的核酸及其产生方法。示例性实施例包括附接至α毒素连接的改善的信号多肽，以及产生和分离α毒素的方法。

背景技术

细菌中的表达可以是药物和工业蛋白质的商业生产的选择的方法。将商业上重要的异源重组蛋白质分泌到大肠杆菌的周质或培养基中，在商业上重要的重组蛋白质的生产中提供了若干个优点，包括节省成本和时间、减少内毒素、在廉价碳源上生长、快速生物量积累、适应高细胞密度发酵和简单的工艺规模扩大。(Mergulhao等人,Biotech Advances[生物技术进展]23:177-202(2005)；Gottesman等人,Annu.Rev.Genet[遗传学年评]30:465-506(1996))。由于这些原因，已经进行了许多研究，例如信号肽修饰和分子伴侣的共表达，以改善重组蛋白在大肠杆菌表达系统中的分泌效率。(Baneyx等人,NatureBiotech[自然生物技术]22:1399-1408(2004)；Choi等人,Appl.MicrobiolBiotechnol[应用微生物学及生物科技]64:625-635(2004)；Cornelis等人,Curr Opinion in Biotech[现代生物技术评论]11:450-454(2000)；Klatt等人,Microbiol CellFactories[微生物细胞工厂]11:97-106(2012))。

在大肠杆菌分泌途径中，信号多肽在分泌过程期间在重组蛋白的易位和分泌中起关键作用。已经研究了许多信号多肽以改善大肠杆菌系统中重组蛋白的分泌。(Humphreys等人,Protein Expression andPurification[蛋白质表达和纯化]20:252-264(2000)；Velaithan等人,Ann Microbiol[微生物学年鉴]64:543-550(2014)；Jonet等人,JMolMicrobiol Biotechnol[分子微生物学与生物技术杂志]22:48-58(2012)；Ismail等人,Biotech letters[生物技术书信]33:999-1005(2011)；Low等人,Bioengineered[生物工程化]3:334-338(2011)；Nagano等人,Biochem Biophys Res Commun[生物化学与生物物理研究通讯]447:655-659(2014))。总体上，重组蛋白质通过细胞质膜分泌到周质间隙中，并且信号肽在输出期间被信号肽酶切割。通常，分泌的重组蛋白质通过外膜从周质间隙胞外释放到培养基中。