[发明专利]PD-1归巢核酸内切酶变体、组合物及使用方法

权利要求书

1.一种多肽，其包含使人程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)基因中的靶位点裂解的归巢核酸内切酶(HE)变体。

2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述HE变体是LAGLIDADG归巢核酸内切酶(LHE)变体。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的多肽，其中所述多肽包含所述HE变体的生物活性片段。

4.根据权利要求3所述的多肽，其中相较于相应野生型HE，所述生物活性片段缺乏1、2、3、4、5、6、7或8个N末端氨基酸。

5.根据权利要求4所述的多肽，其中相较于相应野生型HE，所述生物活性片段缺乏4个N末端氨基酸。

6.根据权利要求4所述的多肽，其中相较于相应野生型HE，所述生物活性片段缺乏8个N末端氨基酸。

7.根据权利要求3所述的多肽，其中相较于相应野生型HE，所述生物活性片段缺乏1、2、3、4或5个C末端氨基酸。

8.根据权利要求7所述的多肽，其中相较于相应野生型HE，所述生物活性片段缺乏C末端氨基酸。

9.根据权利要求7所述的多肽，其中相较于相应野生型HE，所述生物活性片段缺乏2个C末端氨基酸。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的多肽，其中所述HE变体是选自由以下组成的组的LHE变体：I-AabMI、I-AaeMI、I-AniI、I-ApaMI、I-CapIII、I-CapIV、I-CkaMI、I-CpaMI、I-CpaMII、I-CpaMIII、I-CpaMIV、I-CpaMV、I-CpaV、I-CraMI、I-EjeMI、I-GpeMI、I-GpiI、I-GzeMI、I-GzeMII、I-GzeMIII、I-HjeMI、I-LtrII、I-LtrI、I-LtrWI、I-MpeMI、I-MveMI、I-NcrII、I-Ncrl、I-NcrMI、I-OheMI、I-OnuI、I-OsoMI、I-OsoMII、I-OsoMIII、I-OsoMIV、I-PanMI、I-PanMII、I-PanMIII、I-PnoMI、I-ScuMI、I-SmaMI、I-SscMI以及I-Vdi141I。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的多肽，其中所述HE变体是选自由以下组成的组的LHE变体：I-CpaMI、I-HjeMI、I-OnuI、I-PanMI以及SmaMI。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的多肽，其中所述HE变体是I-OnuI LHE变体。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的多肽，其中所述HE变体在如SEQ ID NO:1-5中所述的I-OnuI LHE氨基酸序列或其生物活性片段的DNA识别界面中选自由以下组成的组的氨基酸位置处包含一个或多个氨基酸取代：19、24、26、28、30、32、34、35、36、37、38、40、42、44、46、48、59、68、70、72、75、76 77、78、80、82、168、180、182、184、186、188、189、190、191、192、193、195、197、199、201、203、223、225、227、229、231、232、234、236、238以及240。