[发明专利]生产目标物质的方法

权利要求书

1.一种生产目标物质的方法，所述方法包括以下步骤：

通过使用具有生产所述目标物质的能力的微生物来生产所述目标物质，

其中所述微生物已经以使该微生物具有源自属于拟杆菌门的细菌的O-甲基转移酶基因的方式进行了修饰，

其中所述微生物是谷氨酸棒杆菌，

其中所述目标物质是香草酸,

其中所述O-甲基转移酶基因是编码选自由以下组成的组的蛋白质的基因：

(a)由SEQ ID NO:141的氨基酸序列组成的蛋白质，和

(b)由具有特定突变的SEQ ID NO:141的氨基酸序列组成的蛋白质，其中所述特定突变是下述任一个：M36K,D21Y/M36K/L67F,D21Y/M36K/L67F/Y90A,L31H/M36K/L67F/P144V,L31H/L67F/Y90A,M36K/S42C/L67F,M36K/L67F,M36K/L67F/Y90A,M36K/L67F/Y90A/P144E,M36K/L67F/Y90C,M36K/L67F/Y90C/P144V,M36K/L67F/Y90G,M36K/L67F/Y90S/P144G,M36K/L67F/P144S,M36K/L67F/P144Y,M36K/Y90A/P144V,M36K/P144E,和M36V/L67F/P144S。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述生产包括：

在含有碳源的培养基中培养所述微生物以在所述培养基中生产和积累所述目标物质。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述生产包括：

通过使用所述微生物以将所述目标物质的前体转化成所述目标物质。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述转化包括：

在含有所述前体的培养基中培养所述微生物以在所述培养基中生产和积累所述目标物质。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述转化包括：

在反应混合物中允许所述微生物的细胞作用于所述前体以在所述反应混合物中生产和积累所述目标物质。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述细胞是存在于所述微生物的培养液中的细胞、从所述培养液中收集的细胞、存在于所述培养液的加工产物中的细胞、存在于收集的细胞的加工产物中的细胞，或这些的组合。

7.根据权利要求3至6中任一项所述的方法，其中所述前体是原儿茶酸。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，所述方法还包括收集所述目标物质。

9.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述微生物已经以与未修饰的菌株相比参与所述目标物质的生物合成的酶的活性得以增加的方式进行了进一步的修饰。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述参与目标物质的生物合成的酶选自由以下组成的组：3-脱氧-D-阿拉伯糖-庚酮糖酸7-磷酸合酶、3-脱氢奎尼酸合酶、3-脱氢奎尼酸脱水酶、3-脱氢莽草酸脱水酶、芳族醛氧化还原酶和它们的组合。

11.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述微生物已经以与未修饰的菌株相比磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的活性得以增加的方式进行了进一步的修饰。

12.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述微生物已经以与未修饰的菌株相比参与除所述目标物质以外的物质的副生产的酶的活性得以降低的方式进行了进一步的修饰。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述参与除目标物质以外的物质的副生产的酶选自由以下组成的组：香草酸脱甲基酶、原儿茶酸3,4-双加氧酶、醇脱氢酶、莽草酸脱氢酶和它们的组合。