[发明专利]用于除去酪氨酸硫酸化抗体变体的纯化方法、经纯化的组合物

说明书

本发明涉及纯化的抗体和抗原结合片段组合物，其缺乏在免疫球蛋白链的一个或多个酪氨酸残基上的硫酸化酪氨酸。还提供了用于从抗体和抗原结合片段组合物除去硫酸化酪氨酸变体的纯化方法。

发明领域

本发明涉及包含缺乏酪氨酸硫酸化的抗体及其抗原结合片段的组合物以及用于制备组合物的纯化方法。

发明背景

酪氨酸硫酸化是一种翻译后修饰(PTM)，其中三氧化硫(SO₃)基团共价地结合至氨基酸酪氨酸基团的侧链上的羟基。该PTM发生在转运高尔基体网络中且由两种酶酪氨酰蛋白磺基转移酶(TPST)催化。该分子机制包含活化的硫酸从3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸至酪氨酸的转移，且已经在多种蛋白和肽上发现。最近的发现指示，酪氨酰蛋白磺基转移酶2会识别侧接酸残基的酪氨酸用于硫酸化。该PTM负责强化蛋白之间的相互作用且发生在分泌的蛋白和跨膜蛋白上。已经证实一些趋化因子受体被酪氨酸硫酸化诸如在CCR5（基本的HIV-1和几种糖蛋白激素受体）的N-端细胞外结构域处。例如，水蛭-衍生的凝血酶抑制肽水蛭素的天然形式被酪氨酸硫酸化。令人感兴趣的是，用于治疗多种血液凝固障碍的水蛭素的两种重组形式(Revasc和Refludan)没有硫酸化。硫酸化会使生物分子的质量增加80 Da，这是与三氧化磷部分(PO₃)相同的质量差。不同于PO₃，（其形成相当稳定的P-O键），SO₃是非常不稳定的且容易在高温和低pH条件下分解。

不同的PTM变体在治疗性抗体制品中的存在会导致异质性，根据修饰的位置，这可以导致抗体效能、生物利用度或免疫原性的变化。这样的问题也会在管理机构面前造成问题。尽管已经描述了在趋化因子受体和其它蛋白中的酪氨酸硫酸化，需要鉴别这样的修饰是否发生在抗体制品中，且如果鉴别出的话则除去它们。

发明概述

本发明提供了包含抗-LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8或Ab9)的组合物，例如，其包含：

轻链可变结构域，其包含：

CDR-L1，其包含氨基酸序列：KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38)；

CDR-L2，其包含氨基酸序列：GASNLES (SEQ ID NO: 39)；和

CDR-L3，其包含氨基酸序列：QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40)；和/或

重链可变结构域，其包含：

CDR-H1，其包含氨基酸序列：DYNVD (SEQ ID NO: 33)；

CDR-H2，其包含氨基酸序列：

DINPNNGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 59)；

DINPNSGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 60)；

DINPNDGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 61)；

DINPNQGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 62)；

DINPNGGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 63)；或

DINPNX₁GGTIYX₂QKFX₃X₄ (SEQ ID NO: 64)，其中，X₁= D、N、S或Q, X₂= A或S, X₃= Q或K和X₄= E或G；和