[发明专利]纳米脂质体载体组合物

说明书

本发明涉及其中负载有包含CAS9蛋白、抑制KRAS基因表达的指导RNA和阳离子聚合物之复合物的纳米脂质体载体组合物，或者用于由于其中KRAS基因突变而对抗癌剂具有抗性的结直肠癌的包含所述纳米脂质体载体组合物的治疗剂。西妥昔单抗目前被用作用于转移性结直肠癌的治疗剂，其仅对患有KRAS野生型结直肠癌的患者有效。西妥昔单抗的致命的缺点在于，给予西妥昔单抗的连续治疗时，即使患有KRAS野生型结直肠癌的患者在60％至80％的情况下也可能发生KRAS突变体结直肠癌。然而，使用本发明的纳米脂质体组合物不仅可以从根本上抑制KRAS(其是结直肠癌中的癌基因)的突变，而且还可以非常有效地治疗KRAS突变体转移性结直肠癌。

技术领域

本发明涉及具有包封在纳米脂质体中的Cas9蛋白、指导RNA和阳离子聚合物之复合物的纳米脂质体载体组合物。更具体地，本发明涉及纳米脂质体载体组合物，其中Cas9蛋白、抑制KRAS基因表达的指导RNA和阳离子聚合物的复合物包封在纳米脂质体中，或涉及用于改善或治疗由 KRAS基因突变引起的对抗癌药物具有抗性的结直肠癌的包含所述纳米脂质体载体组合物的组合物。

背景技术

基因编辑技术是源自微生物的适应性免疫的技术。这开始集中于这样的免疫系统，其中噬菌体片段通过噬菌体感染被记忆为DNA，然后被Cas9 (CRISPR相关蛋白9：RNA指导的DNA核酸内切酶)切割，Cas9是当再次感染时充当基因剪刀的核酸酶；并且已发展成如果基因组中的特定碱基序列被指导RNA(guide RNA，gRNA)识别，则允许切割期望位点的基因校正技术(Woo JW等，2015)。

该技术作为治疗基因突变诱导的疾病(其被认为是无法治愈的疾病) 的根本病因的方法而受到关注。然而，仍然存在待解决的问题，例如基因编辑系统的有效体内递送和靶基因之外基因的脱靶。特别地，使用最初使用的Cas9质粒的基因编辑系统的安全性需要关于体内递送时的多种免疫应答和抗生素抗性进行验证。最近，用于体外产生由蛋白质和指导RNA 构成的基因剪刀(Cas9)和递送其的系统已被用作另外的替代，但也存在与有效地递送至细胞以及蛋白质和RNA的稳定性相关的问题 (Ramakrishna S等，2014)。

结直肠癌是由在大肠中出现的癌细胞构成的恶性肿瘤。由于大肠完全吸收来自小肠中的食物的水分、收集直肠中的剩余物质并以粪便的形式将其排出，包含致癌物质或在人体内无用的物质的废物(而不是营养物质) 聚集在大肠中，大肠因此比其他器官更容易成为癌细胞生长的部位。

常规结直肠癌治疗通过手术和抗癌化疗进行，并且西妥昔单抗 (Erbitux)注射是典型的靶向治疗。西妥昔单抗是一种单克隆抗体，其靶向表皮生长因子受体(epidermalgrowth factor receptor，EGFR)，并且特异性结合结直肠癌细胞表面的EGFR，从而抑制引起癌细胞增殖的信号传导通路的预定部分，以由此抑制癌细胞的整体增殖。然而，具有KRAS(为结直肠癌中的癌基因)突变的患者(所有结直肠癌患者的40％至50％)不能用这种注射治疗。此外，当具有野生型KRAS基因的结直肠癌患者继续进行西妥昔单抗治疗时，其60％至80％出现KRAS基因突变。

KRAS是与结直肠癌的产生相关的数种基因之一，并且在决定定制治疗(例如西妥昔单抗)的有效性方面被认为是非常重要的，因为已知结直肠癌患者的药物响应和存活时间取决于是否发生KRAS基因突变而显著改善。

同时，细胞内药物递送系统中所需的两个重要特性是效率和细胞毒性 (安全性)，并且由胆固醇或脂质构成的纳米脂质体载体技术被广泛使用 (Zuris JA等，2015)。

因此，本发明人已经通过将Cas9蛋白、抑制KRAS基因表达的指导 RNA和阳离子聚合物的复合物包封在纳米脂质体中制备了具有良好药物递送效率的细胞载体，以通过基因编辑治疗结直肠癌，并已使用所述细胞载体作为治疗剂用于结直肠癌的治疗，从而最终实现本发明。

[引用列表]