[发明专利]用于产生具有非功能性T细胞受体(TCR)的T细胞的试剂、包含其的组合物及其用途

权利要求书

1.一种包含两种或更多种具有编码短发夹微RNA(shmiR)的DNA序列的核酸的DNA指导的RNA干扰(ddRNAi)构建体，其中每种shmiR包含：

长度为至少17个核苷酸的效应子序列；

效应子互补序列；

茎环序列；和

初级微RNA(pri-miRNA)骨架；

其中每种shmiR的效应子序列与选自由以下组成的组的T细胞受体(TCR)复合物亚基的mRNA转录物中具有相应长度的区域基本上互补：CD3-ε、TCR-α、TCR-β、CD3-γ和CD3-δ。

2.如权利要求1所述的ddRNAi构建体，其中每个shmiR以5'至3'方向包含：

所述pri-miRNA骨架的5'侧翼序列；

所述效应子互补序列；

所述茎环序列；

所述效应子序列；和

所述pri-miRNA骨架的3'侧翼序列。

3.如权利要求2所述的ddRNAi构建体，其中所述茎环序列是SEQ ID NO:97中所示的序列。

4.如权利要求2或权利要求3所述的ddRNAi构建体，其中所述pri-miRNA骨架是pri-miR-31a骨架。

5.如权利要求4所述的ddRNAi构建体，其中所述pri-miRNA骨架的5'侧翼序列示于SEQID NO:98中，并且所述pri-miRNA骨架的3'侧翼序列示于SEQ ID NO:99中。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的ddRNAi构建体，其中所述两种或更多种核酸选自：

(i)包含编码包含效应子序列的shmiR-CD3-ε的DNA序列或由其组成的核酸，所述效应子序列与所述CD3-ε亚基的mRNA转录物中具有相应长度的区域基本上互补；

(ii)包含编码包含效应子序列的shmiR-CD3-γ的DNA序列或由其组成的核酸，所述效应子序列与所述CD3-γ亚基的mRNA转录物中具有相应长度的区域基本上互补；和

(iii)包含编码包含效应子序列的shmiR-TCR-β的DNA序列或由其组成的核酸，所述效应子序列与所述TCR-β亚基的mRNA转录物中具有相应长度的区域基本上互补。

7.如权利要求6所述的ddRNAi构建体，所述ddRNAi构建体包含：

(i)包含编码包含效应子序列的shmiR-CD3-ε的DNA序列或由其组成的核酸，所述效应子序列与所述CD3-ε亚基的mRNA转录物中具有相应长度的区域基本上互补；

(ii)包含编码包含效应子序列的shmiR-CD3-γ的DNA序列或由其组成的核酸，所述效应子序列与所述CD3-γ亚基的mRNA转录物中具有相应长度的区域基本上互补；和

(iii)包含编码包含效应子序列的shmiR-TCR-β的DNA序列或由其组成的核酸，所述效应子序列与所述TCR-β亚基的mRNA转录物中具有相应长度的区域基本上互补。

8.如权利要求6或权利要求7所述的ddRNAi构建体，其中：

(i)shmiR-CD3-ε包含SEQ ID NO:134中所示的效应子序列；

(ii)shmiR-CD3-γ包含SEQ ID NO:120中所示的效应子序列；和

(iii)shmiR-TCR-β包含SEQ ID NO:116中所示的效应子序列。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的ddRNAi构建体，其中：

(i)shmiR-CD3-ε包含SEQ ID NO:134中所示的效应子序列和SEQ ID NO:135中所示的效应子互补序列；

(ii)shmiR-CD3-γ包含SEQ ID NO:120中所示的效应子序列和SEQ ID NO:121中所示的效应子互补序列；和

(iii)shmiR-TCR-β包含SEQ ID NO:116中所示的效应子序列和SEQ ID NO:117中所示的效应子互补序列。